RESUMO

Ten captive neotropical Brazilian feline were submitted to gastroscopic examination and samples of gastric mucosa from fundus, corpus and pyloric antrum were evaluated for the presence of Helicobacter species. Warthin-Starry (WS) staining and PCR assay with species-specific primers and enzymatic cleavage were applied for bacterial detection and identification. Histological lesions were evaluated by haematoxylin and eosin staining. All animals showed normal gross aspect of gastric mucosa. Helicobacter heilmannii was confirmed in 100% of the samples by WS and PCR assay. Mild lymphocytic infiltrate in the lamina propria was observed in eight animals, mainly in the fundus region. Small lymphoid follicles were seen in three animals. No significant association between Helicobacter infection and histological findings was verified. These observations suggest that gastric Helicobacter spp. could be a commensal or a eventual pathogen to captive neotropical feline, and that procedures, way life, and stress level on the shelter apparently had no negative repercussion over the integrity of the stomach.

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The aim of this study was the evaluation of some reproductive rates of a beef cattle herd that were naturally infected by the bovine herpesvirus 1 (BoHV-1), bovine viral diarrhea virus (BVDV) and Leptospira hardjo. In a herd with 1331 females, we randomly selected 208 animals that were distributed in three groups: i) 60 virgin heifers; ii) 60 first suckling cows; iii) 88 cows with two or more sucklings. All groups were evaluated for infectious bovine rinothracheitis (IBR), bovine viral diarrhea (BVD), and leptospirosis serological profile, and the reproductive performance in a breeding station that had artificial insemination (AI) followed by bull repass. The IBR, BVD and leptospirosis seropositive rates in the three groups were 68.3%, 98.0% and 78.8%, respectively. The highest seropositives rates for the three infections simultaneously were obtained in the cows with two or more sucklings. The three groups presented low reproductive performance with 35.6% of repeat breeding; 18.6% of abortions, 2.3 semen doses by born calf, and 35.6% of born calves by AI. The lowest reproductive performance was observed in the virgin heifers group. The serological profile analysis before the breeding time with association with the results of some reproductive efficiency rates suggest the BoHV-1 and L. hardjo participation in the low reproductive performance observed in the beef cattle herd stud

O objetivo desse trabalho foi avaliar a performance reprodutiva de um rebanho bovino de corte, criado extensivamente, naturalmente infectado pelo herpesvírus bovino 1 (BoHV-1), pelo vírus da diarréia viral bovina (BVDV) e pela Leptospira hardjo. No rebanho, constituído por 1.331 fêmeas, foram selecionados aleatoriamente 208 animais que foram subdivididos em três grupos: i) 60 novilhas virgens; ii) 60 vacas de primeira cria; iii) 88 vacas com duas ou mais crias. No período correspondente a uma estação de reprodução, obtida por inseminação artificial (IA) seguida por repasse com touro, foram avaliados o desempenho reprodutivo e os perfis sorológicos para a rinotraqueíte infecciosa bovina (IBR), a diarréia viral bovina (BVD) e a leptospirose. As taxas de animais soropositivos para IBR, BVD e leptospirose nos grupos avaliados foram de 68,3%, 98,0% e 78,8%, respectivamente. O grupo de animais com duas ou mais crias apresentou as maiores taxas de animais soropositivos para as três infecções simultaneamente. Os três grupos presentaram baixo desempenho reprodutivo com 35,6% de repetições de cio; 18,6% de abortamentos; 2,3 doses de sêmen por bezerro nascido e 35,6% de animais nascidos de IA. A mais baixa performance reprodutiva foi observada no grupo de novilhas. A análise do perfil sorológico anterior à estação de monta, em associação com os resultados de alguns parâmetros de eficiênci

RESUMO

The serological techniques Rapid Conglutination Test (RCT), Indirect ELISA (iELISA) and Indirect Immunofluorescent Assay (IFA), using the competition ELISA (cELISA) as gold test, were comparatively evaluated to detect antibodies against Anaplasma marginale. A total of 453 sera from vaccinated and non vaccinated cattle and, collected from enzootic stability and instability areas were tested. iELISA, IFA and TCR presented kappa index = 0.77 (substantial); 0.57 and 0.49 (moderate), sensibility of 90.6%; 90.2% and 73.7% and specificity of 86.6%; 62.8%, and 79.3%, respectively. Therefore, iELISA presented better specificity than IFA and RCT, and can be indicated for more detailed serological investigations, detection of persistently infected animals in cattle herds and for monitorating of vaccination programs. IFA and TCR can be used in prevalence studies and to monitor cattle movement between different geographical regions.

Os testes sorológicos de Conglutinação Rápida (TCR) Imunofluorescência Indireta (IFI) e Imunoenzimáticos Indireto (iELISA) utilizando ELISA por competição (cELISA), como padrão ouro, foram avaliados comparativamente para a detecção de anticorpos contra o Anaplasma marginale. Foram utilizadas 453 amostras de soros sangüíneos de bovinos vacinados e não-vacinados e de áreas de estabilidade e instabilidade enzoótica. O iELISA, IFI e TCR apresentaram respectivamente, índice kappa=0,77 (substancial), 0,57 e 0,49 (moderado), sensibilidade de 90,6%, 90,2% e 73,7% e especificidade de 86,6%, 62,8%, e 79,3%. O iELISA apresentou o melhor desempenho e maior especificidade, podendo ser indicado na avaliação do perfil sorológico de rebanhos, na detecção de animais persistentemente infectados e de animais submetidos a programas de vacinação. As técnicas de IFI e TCR, mesmo apresentando desempenho inferior, podem ser recomendadas para a realização de inquéritos epidemiológicos e para o monitoramento de animais em trânsito entre as diferentes regiões geográficas.

RESUMO

The reproductive efficiency in beef cattle breeding herds is one of the aspects of greater highlight for the financial success of the investment. In the present revision the main parameters used to evaluate the reproductive performance of cows in extensive management will be approached, as well as the more important infectious causes of the reproductive failures that affect the costs of the production.

Na pecuária bovina de corte especializada na cria de bezerros a eficiência da reprodução é um dos aspectos de maior destaque para o sucesso financeiro do investimento. Na presente revisão serão abordados os principais parâmetros utilizados para avaliar o desempenho reprodutivo de vacas de corte criadas extensivamente, bem como as principais causas infecciosas de falhas na reprodução que comprometem os custos da produção.

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An indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using non-purified antigen was developed for serological diagnosis of the bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) infection. Some blocking substances to prevent nonspecific reactions were evaluated in different concentrations and combinations. The best results were obtained using 5% skim milk powder as blocking solution and the serum/conjugated buffer added with 10% MDBK cells, 10% equine serum, 1% skim milk powder. The system was evaluated with a collection of positives (n=60) and negatives (n=62) bovine serum previously analyzed by seroneutralization (SN) technique for the BoHV-1 antibodies. The indirect ELISA standardized showed 98.3% of sensitivity and 95.2% of specificity (kappa: 0.93) when compared with the SN technique. These results would allow its implantation in the laboratorial routine for the serological diagnosis of the BoHV-1 infection. The use of non-purified antigen in ELISA facilitate the elaboration, reduces the production cost and makes possible the application of these technique in seroepidemiological study of the BoHV-1 infection in cattle herds.

Um ensaio imunoenzimático (ELISA) indireto utilizando antígeno não purificado foi desenvolvido para o diagnóstico sorológico da infecção pelo herpesvírus bovino 1 (BoHV-1). Nos experimentos de padronização várias substâncias bloqueadoras de reações inespecíficas foram avaliadas em diferentes concentrações e associações. Os melhores resultados foram obtidos utilizando-se leite em pó desnatado (5%) como solução de bloqueio e o tampão de diluição dos soros/conjugado acrescido de células MDBK (10%), soro de eqüino (10%) e leite em pó desnatado (1%). O sistema foi avaliado frente a uma coleção de soros bovinos positivos (n=60) e negativos (n=62) para o BoHV-1 por meio da técnica de soro-neutralização (SN). O ELISA indireto padronizado nesse estudo, quando comparado com a SN, apresentou 98,3% de sensibilidade e 96,8% de especificidade (kappa: 0,93), valores que possibilitam a sua implantação na rotina laboratorial para o diagnóstico sorológico da infecção pelo BoHV-1. O desenvolvimento de um sistema de ELISA indireto utilizando antígeno não purificado facilita a elaboração da técnica, reduz o custo de produção e possibilita a sua aplicação em inquéritos soroepidemiológicos da infecção pelo BoHV-1 em rebanhos bovinos.

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The RT-PCR technique was optimized and evaluated to detect the 5 untranslated region of bovine viral diarrhea virus (BVDV) from clinical samples that consisted of blood serum and whole blood artificially contaminated with the NADL strain of BVDV. To optimization of technique, the following conditions were evaluated: i) two pairs of primers, 103 / 372 (WEINSTOCK et al., 2001) and 324 / 326 (VILCEK et al., 1994), ii) four methods of nucleic acid extraction (phenol/chloroform/isoamyl alcohol; silica/guanidine isothiocyanate; a combination of the two previous methods; and TRIzol) and iii) different concentrations and compositions of reagents and time/temperature of the reactions. Between the alternatives tested that resulted in the amplification of the 290 bp product that was easily visualized in ethidium bromide stained 2% agarose gel was that presented the following conditions: i) primers 103 and 372; ii) initial volume and clinical sample: 50 mL of blood serum; iii) extraction of nucleic acid: silica/guanidine isothiocyanate method; iv) reverse transcription: 9 mL extracted nucleic acid, 1xPCR buffer (20 mM Tris-HCl pH 8.4 and 50 mM KCl), 1.5 mM MgCl2; 60 units of reverse transcriptase enzyme M-MLV, RNA denaturation at 97C / 4 min, and reverse transcription at 42C / 30 min; v) PCR: primers 103 / 372 with anneling temperature at 59C. The utilization of RT-PCR within these op

A técnica da RT-PCR foi otimizada e avaliada para a detecção da região 5 terminal não-traduzida do genoma do vírus da diarréia viral bovina (BVDV) em amostras clínicas de bovinos, constituídas por soro sangüíneo e sangue total, artificialmente contaminadas com a estirpe NADL do BVDV. Para a otimização da técnica foram avaliados: i) dois pares de primers, 103 / 372 (WEINSTOCK et al., 2001) e 324 / 326 (VILCEK et al., 1994) ii) quatro métodos de extração do ácido nucléico (fenol / clorofórmio / álcool isoamílico; sílica / isotiocianato de guanidina; uma combinação dos dois métodos anteriores e TRIzol) e iii) diferentes concentrações e composições de reagentes, tampões e tempo/temperatura das reações. Entre todas as alternativas testadas a que resultou na amplificação de um produto com 290 pb, que foi facilmente visualizado em gel de agarose 2% com brometo de etídeo, foi a que empregou as seguintes condições: i) primers 103 e 372; ii) volume inicial e amostra clínica: 50 mL de soro sangüíneo; iii) extração do ácido nucléico: método da sílica / isotiocianato de guanidina, iv) transcrição reversa: 9 mL do ácido nucléico extraído, 1xPCR buffer (20 mM Tris-HCl pH 8,4 e 50 mM KCl), 1,5 mM MgCl2, 60 unidades da enzima transcriptase reversa M-MLV, desnaturação do RNA a 97C / 4 min e transcrição reversa a 42C / 30 min e v) PCR: primers 103 / 372 com temperatura de anelamento de 59C.