RESUMO
This study aimed to identify proteins in the seminal plasma associated with fertility in sheep of Santa Inês in Manaus, AM, using twodimensional electrophoresis techniques associated with mass spectrometry. Semen samples from eight adult sheep were collected by removing an aliquot for the physical and morphological assessments of semen and seminal plasma was subjected to SDS-PAGE profile and two-dimensional electrophoresis. Gels were stained with colloidal Coomassie, scanned and analyzed using ImageMaster 2D Platinum software, version 6.0. The selected individual spots were cut from the master gel, digested with trypsin and subjected to identification by mass spectrometry (MALDITof / Tof). Of the 108 spots detected in the gel, it selected 10 differential spots (based on the distribution thereof in the bidimensional gel and pre-analysis of the 2D ImageMaster Platinum Software) identifying 03 proteins: clusterin, a protein 14-3-3 zeta chain and Ram Seminal versicles 22kDa Protein. The identity of these proteins implies that the components of seminal plasma participate in physiological processes involved in sperm protection, motility and sperm capacitation, all associated with fertility. These proteins need to be better studied to see whether the same could be used as molecular markers of fertility as they were also found in other studies conducted with sheep Santa Ines.
Este estudo teve como objetivo identificar proteínas do plasma seminal associadas à fertilidade em ovinos da raça Santa Inês em Manaus, AM, utilizando técnicas de eletroforese bidimensional associadas à espectrometria de massa. Amostras de sêmen de oito carneiros adultos foram coletadas, retirando-se uma alíquota para as avaliações físicas e morfológicas do sêmen, e o plasma seminal foi submetido ao perfil SDS-PAGE e à eletroforese bidimensional. Os géis foram corados com Coomassie coloidal, digitalizados e analisados no aplicativo ImageMaster 2D Platinum, versão 6.0. Os spots selecionados foram cortados individualmente do gel mestre, digeridos com tripsina e submetidos à identificação por espectrometria de massa (MALDI-Tof/Tof). Dos 108 spots detectados no gel, selecionou-se 10 spots diferenciais (com base na distribuição dos mesmos no gel bidimensional e com a pré-análise destes no ImageMaster 2D Platinum Software), identificando-se 03 proteínas: a clusterina, a 14-3-3 protein zeta chain e a Ram Seminal Versicles 22kDa Protein. A identidade dessas proteínas infere que os componentes do plasma seminal participam de processos fisiológicos ligados à proteção do espermatozoide, sua motilidade e capacitação espermática, todos associados à fertilidade. Essas proteínas precisam ser melhor estudadas para verificar se as mesmas poderiam ser utilizadas como marcadores moleculares de fertilidade, já que também foram encontradas em outros trabalhos realizados com ovinos da raça Santa Inês.
Assuntos
Animais , Ovinos/anatomia & histologia , Ovinos/classificação , Ovinos/crescimento & desenvolvimento , Proteínas de Plasma Seminal/análise , Proteínas de Plasma Seminal/classificação , Eletroforese , Eletroforese/veterinária , FertilidadeRESUMO
This study aimed to identify proteins in the seminal plasma associated with fertility in sheep of Santa Inês in Manaus, AM, using twodimensional electrophoresis techniques associated with mass spectrometry. Semen samples from eight adult sheep were collected by removing an aliquot for the physical and morphological assessments of semen and seminal plasma was subjected to SDS-PAGE profile and two-dimensional electrophoresis. Gels were stained with colloidal Coomassie, scanned and analyzed using ImageMaster 2D Platinum software, version 6.0. The selected individual spots were cut from the master gel, digested with trypsin and subjected to identification by mass spectrometry (MALDITof / Tof). Of the 108 spots detected in the gel, it selected 10 differential spots (based on the distribution thereof in the bidimensional gel and pre-analysis of the 2D ImageMaster Platinum Software) identifying 03 proteins: clusterin, a protein 14-3-3 zeta chain and Ram Seminal versicles 22kDa Protein. The identity of these proteins implies that the components of seminal plasma participate in physiological processes involved in sperm protection, motility and sperm capacitation, all associated with fertility. These proteins need to be better studied to see whether the same could be used as molecular markers of fertility as they were also found in other studies conducted with sheep Santa Ines.(AU)
Este estudo teve como objetivo identificar proteínas do plasma seminal associadas à fertilidade em ovinos da raça Santa Inês em Manaus, AM, utilizando técnicas de eletroforese bidimensional associadas à espectrometria de massa. Amostras de sêmen de oito carneiros adultos foram coletadas, retirando-se uma alíquota para as avaliações físicas e morfológicas do sêmen, e o plasma seminal foi submetido ao perfil SDS-PAGE e à eletroforese bidimensional. Os géis foram corados com Coomassie coloidal, digitalizados e analisados no aplicativo ImageMaster 2D Platinum, versão 6.0. Os spots selecionados foram cortados individualmente do gel mestre, digeridos com tripsina e submetidos à identificação por espectrometria de massa (MALDI-Tof/Tof). Dos 108 spots detectados no gel, selecionou-se 10 spots diferenciais (com base na distribuição dos mesmos no gel bidimensional e com a pré-análise destes no ImageMaster 2D Platinum Software), identificando-se 03 proteínas: a clusterina, a 14-3-3 protein zeta chain e a Ram Seminal Versicles 22kDa Protein. A identidade dessas proteínas infere que os componentes do plasma seminal participam de processos fisiológicos ligados à proteção do espermatozoide, sua motilidade e capacitação espermática, todos associados à fertilidade. Essas proteínas precisam ser melhor estudadas para verificar se as mesmas poderiam ser utilizadas como marcadores moleculares de fertilidade, já que também foram encontradas em outros trabalhos realizados com ovinos da raça Santa Inês.(AU)