RESUMO
ABSTRACT Introduction: Flow cytometry has become an increasingly important tool in the clinical laboratory for the diagnosis and monitoring of many hematopoietic neoplasms. This method is ideal for immunophenotypic identification of cellular subpopulations in complex samples, such as bone marrow and peripheral blood. In general, 4-color panels appear to be adequate, depending on the assay. In acute leukemias (ALs), it is necessary identify and characterize the population of abnormal cells in order to recognize the compromised lineage and classify leukemia according to the WHO criteria. Although the use of eightto ten-color immunophenotyping panels is wellestablished, many laboratories do not have access to this technology. Objective and Method: In 2015, the Brazilian Group of Flow Cytometry (Grupo Brasileiro de Citometria de Fluxo, GBCFLUX) proposed antibody panels designed to allow the precise diagnosis and characterization of AL within available resources. As many Brazilian flow cytometry laboratories use four-color immunophenotyping, the GBCFLUX has updated that document, according to current leukemia knowledge and after a forum of discussion and validation of antibody panels. Results: Recommendations for morphological analysis of bone marrow smears and performing screening panel for lineage (s) identification of AL were maintained from the previous publication. The lineage-oriented proposed panels for B and T cell acute lymphoblastic leukemia (ALL) and for acute myeloid leukemia (AML) were constructed for an appropriate leukemia classification. Conclusion: Three levels of recommendations (i.e., mandatory, recommended, and optional) were established to enable an accurate diagnosis with some flexibility, considering local laboratory resources and patient-specific needs.
Assuntos
Leucemia/diagnóstico , Citometria de Fluxo , Leucemia-Linfoma Linfoblástico de Células Precursoras , Anticorpos MonoclonaisRESUMO
RESUMO O cobre (Cu) é um contaminante frequente das águas residuais, o que pode levar a intoxicação humana e danos ambientais. A hidroxiapatita (HAP) pode ser utilizada para remoção dessa substância de efluentes, pois é de fácil produção e alto rendimento. Assim, o presente estudo objetivou analisar a influência de vários fatores (factorial design) na adsorção do Cu+2 em solução. A HAP foi produzida por meio de precipitação aquosa e, subsequentemente, caracterização por difração de raios X (DRX), espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier (FTIR), espectroscopia por energia dispersiva (EDS) e microscopia eletrônica de transmissão (TEM). A influência das variáveis pH, concentração inicial (Ci) e massa adsorvente na adsorção de Cu+2 foi analisada por intermédio de um planejamento fatorial 12 (23), com 4 pontos centrais. As três variáveis analisadas foram estatisticamente significantes, sendo possível observar remoções acima de 80% do metal dissolvido em solução. A análise de variância (ANOVA) mostrou que o pH da solução (1), a massa adsorvente (3), a concentração inicial de metal (2) e a interação 2x3 (23) foram estatisticamente significantes. A eficiência máxima de remoção de Cu+2 obtida no procedimento de otimização foi de 85,33%.
ABSTRACT Copper is a frequent contaminant of wastewater, which can lead to human intoxication and environmental damage. The hydroxyapatite (HAP) can be used to remove this substance from wastewater, as it is easy to produce and has high yield. Thus, the present study aimed to analyze the influence of several factors (factorial design) on the adsorption of Cu+2 in solution. HAP was produced by means of aqueous precipitation and subsequently characterized by XRD, FTIR, EDS, and TEM. The influence of the variables pH, initial concentration (Ci), and adsorbent mass on the adsorption of Cu+2 was performed through 12 factorial design (23), with four central points. The three variables analyzed were statistically significant, being possible to observe removals above 80% of the dissolved metal in solution. The analysis of variance (ANOVA) showed that the pH of the solution (1), the adsorbent mass (3), the initial concentration of metal (2), and the interaction 2×3 were statistically significant. The maximum Cu+2 removal efficiency obtained in the optimization procedure was 85.33%.
RESUMO
INTRODUCTION: Flow cytometry has become an increasingly important tool in the clinical laboratory for the diagnosis and monitoring of many hematopoietic neoplasms. This method is ideal for immunophenotypic identification of cellular subpopulations in complex samples, such as bone marrow and peripheral blood. In general, 4-color panels appear to be adequate, depending on the assay. In acute leukemias (ALs), it is necessary identify and characterize the population of abnormal cells in order to recognize the compromised lineage and classify leukemia according to the WHO criteria. Although the use of eight- to ten-color immunophenotyping panels is wellestablished, many laboratories do not have access to this technology. OBJECTIVE AND METHOD: In 2015, the Brazilian Group of Flow Cytometry (Grupo Brasileiro de Citometria de Fluxo, GBCFLUX) proposed antibody panels designed to allow the precise diagnosis and characterization of AL within available resources. As many Brazilian flow cytometry laboratories use four-color immunophenotyping, the GBCFLUX has updated that document, according to current leukemia knowledge and after a forum of discussion and validation of antibody panels. RESULTS: Recommendations for morphological analysis of bone marrow smears and performing screening panel for lineage (s) identification of AL were maintained from the previous publication. The lineage-oriented proposed panels for B and T cell acute lymphoblastic leukemia (ALL) and for acute myeloid leukemia (AML) were constructed for an appropriate leukemia classification. CONCLUSION: Three levels of recommendations (i.e., mandatory, recommended, and optional) were established to enable an accurate diagnosis with some flexibility, considering local laboratory resources and patient-specific needs.
RESUMO
BACKGROUND: Despite the advances in the cure rate for acute myeloid leukemia (AML), a considerable number of patients die from the disease due to the occurrence of multidrug resistance (MDR). Overexpression of the transporter proteins, such as P-glycoprotein (Pgp) and multidrug resistance-associated protein (MRP), confers resistance to the treatment of these leukemias. METHODS: To analyze the expression of the Pgp and MRP1 in patients with AML and determine their correlation between expression and demographic, clinical, and laboratorial variables, bone marrow and peripheral blood samples from 346 patients with a diagnosis of AML were assessed for the expression of Pgp and MRP1 by flow cytometry. RESULTS: The expression of Pgp and MRP1 was found in 111 (32.1%) and 133 (38.4%) patients, respectively, with greater prevalence in older patients and lower in children, while also observing a high incidence in patients with refractory, recurrence, and secondary disease in comparison with the cases of de novo AML. Regarding the laboratory findings, we observed an association between the expression of Pgp and MRP1 and CD34, CD7, and also M7, M5a, and M2-AML of French-American-British classification. CONCLUSIONS: The results showed that the detection of MDR phenotype by flow cytometry can be a molecular marker for prognosis of patients with AML.
Assuntos
Membro 1 da Subfamília B de Cassetes de Ligação de ATP/genética , Leucemia Mieloide Aguda/diagnóstico , Leucemia Mieloide Aguda/genética , Proteínas Associadas à Resistência a Múltiplos Medicamentos/genética , Membro 1 da Subfamília B de Cassetes de Ligação de ATP/metabolismo , Adolescente , Adulto , Idoso , Idoso de 80 Anos ou mais , Biomarcadores , Biomarcadores Tumorais , Criança , Pré-Escolar , Resistência a Múltiplos Medicamentos , Resistencia a Medicamentos Antineoplásicos , Feminino , Citometria de Fluxo , Humanos , Imunofenotipagem , Lactente , Leucemia Mieloide Aguda/metabolismo , Leucemia Mieloide Aguda/mortalidade , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Proteínas Associadas à Resistência a Múltiplos Medicamentos/metabolismo , Fenótipo , Prognóstico , Avaliação de Sintomas , Adulto JovemRESUMO
The authors conducted a flow cytometry immunophenotyping study in patients with acute lymphoblastic leukemia (ALL) from Natal, Rio Grande do Norte, Brazil. The patients (n = 126) were newly diagnosed using a panel of monoclonal antibodies: CD1a, CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD10, CD13, CD33, CD14, CD19, CD22, CD79a, CD117, CD34, anti-IgM, anti-TdT, anti-HLA-Dr, and anti-human kappa and lambda light chains. Additional data, such as patients' age and gender, clinical and laboratory findings such as presence of tumor masses, lymphadenopathy, hepatomegaly, splenomegaly, leukemic infiltration in the central nervous system (CNS) were also investigated. Results showed that 56.7% of the cases were B-lineage ALL and 55% were T-cell ALL. Also, we found that males were more affected by the disease, regardless of immunological classification. The correlation between age and immunological subtypes showed that the B-lineage ALL occurred more frequently in patients aged under 15 while the T-cell ALL subtype was more frequent in adults. Immunophenotypic profiles and morphological subtypes showed a direct correlation between L3 subtype and B-lineage ALL, while L1 and L2 subtypes correlated more often with B-cell lineage and T-cell ALL, respectively. Correlation analysis between immunophenotypic and clinical profiles showed that T-cell ALL was more associated with a higher incidence of lymphadenopathy, hepatomegaly, splenomegaly and CNS leukemic infiltration, also showing a greater blast cell count in peripheral blood than the other subgroups. The presented data suggest that immunophenotyping is an important method in the diagnosis, monitoring and prognostic assessment in determining the pathological mechanisms of evolution of ALL.
Assuntos
Leucemia-Linfoma Linfoblástico de Células Precursoras/classificação , Adolescente , Adulto , Antígenos CD/sangue , Antígenos CD/química , Antígenos CD/classificação , Criança , Pré-Escolar , Citometria de Fluxo/métodos , Humanos , Imunofenotipagem/métodos , Lactente , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Leucemia-Linfoma Linfoblástico de Células Precursoras/diagnóstico , Leucemia-Linfoma Linfoblástico de Células Precursoras/imunologia , Leucemia-Linfoma Linfoblástico de Células Precursoras/metabolismo , Prognóstico , Resultado do TratamentoRESUMO
O cancer cervical e o segundo mais comum entre mulheres no mundo e apresenta altas taxas de mortalidade feminina, tendo sido demonstrado o envolvimento do Papilomavirus humano (HPV) em 99,7% dos tumores cervicais. Realizou-se estudo retrospectivovisando avaliar a sensibilidade da citopatologia para lesoes cervicais associadas ao HPV, atraves de analise comparativa com a colposcopia, em mulheres atendidas em Clinica Privada da cidade de Natal RN, no periodo de 2004 a 2007. Analisou-se 504 laudoscitopatologicos e colposcopicos. Os resultados demonstraram prevalencia da papilomavirose em 4,96% dos casos, para os dois metodos, na faixa etaria acima de 36 anos. Na citopatologia foi evidenciada associacao da virose com metaplasia escamosa (28%), lesoesintra-epiteliais de baixo grau LSIL (4,37%), lesoes intra-epiteliais de alto grau - HSIL (0,60%) e atipias de significado indeterminado em celulas escamosas - ASC-US (0,40%). Quando comparados, os resultados apresentaram-se concordantes em 80% dos casos e discordantes em 20%. Conclui-se que a citopatologia apresentou alta sensibilidade para rastreamento das lesoes cervicais associadas ao HPV na clientela estudada.
Cervical cancer is the second most common type in women around the world, present high rate of feminine mortality, had been demonstrated an involvement of Human Papillomavirus (HPV) in 99,7% of cervical lesions. It was made a retrospective study focusing on sensitivity evaluation of cytopathology in cervical lesions with HPV association, through comparative analysis with colposcopy, in women patients of a Private Clinic at Natal RN, from April 2004 to April 2007. 504 cytopathological and colposcopicalexams were analysed. The results shaw 4,96% of papillomavirus prevalence for both methods, mainly in patients older than 36 years. In cytopathology was evidenced events associated to squamous metaplasy (28%), Low-grade aquamous intraepithelial lesion LSIL (4,37%), High-grade squamous intraepithelial lesion - HSIL (0,60%) and Atypical squamous cells of undetermined significance - ASC-US (0,40%). According the results, it was verified that 80% of cases were coincidents for cervical lesions by HPV with 20% of divergence. The present study concluded that cytopathology presented high sensitivity for cervical lesions associated to HPV investigationin studied customers.
Assuntos
Humanos , Feminino , Adolescente , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Displasia do Colo do Útero , Colposcopia , Sondas de DNA de HPV , Infecções por PapillomavirusRESUMO
Um dos mais bem caracterizados mecanismos de resistência às drogas (MDR) nas leucemias são os mediados pela glicoproteína P (PGP) e proteína relacionada a múltiplas drogas (MRP). Diversos relatos têm demonstrado que a superexpressão dessas proteínas podem ser medianas pela superexpressão da proteína p53 inativada. O objetivo deste estudo foi investigar a co-expressão da p53, PGP e MRP em diferentes tipos de leucemias pela citometria de fluxo. Analisou-se amostras de 223 pacientes leucêmicos: 64 leucemia linfocítica crônica (LLC), 43 leucemia mielóide aguda (LMA), 44 leucemia linfoblástica aguda (LLA), e 72 leucemia mielóide crônica (LMC). A p53 foi observada em 23,6% na LMC, 21,8% na LLC, 44,2% na LMA e 29,4% na LLA. A Pgp em 46,4% na LMC, 47,5% LLC, 62,8% LMA e 20% LLA e a MRP em 31,9% na LMC, 40,6% na LLC, 44,2% na LMA e 40,1% na LLA. Observou-s co-expressão estatisticamente significativa entre p53 e Pgp na LMC (p=0,0066) e na LMA (p=0,0013) e p53 e MRP na LMC (p=0,000066), na LLC (p=0,0079) e LMA (0,00044), sendo observado predomínio dessas associações nos estágios avançados dessas doenças. Estes resultados demonstraram que as pesquisas desses marcadores possam servir como indicadores de evolução clínica e prognóstico para estas leucemias.
Assuntos
Humanos , Resistência a Múltiplos Medicamentos , Citometria de Fluxo , Leucemia , Membro 1 da Subfamília B de Cassetes de Ligação de ATPRESUMO
A proteína p53 desempenha um importante papel no controle do ciclo de celular e reparo no DNA danificado. Em pacientes com leucemia de mielóide crônica (LMC) as mutações neste gene são encontradas em até 30% dos casos, especialmente na crise blástica (LMC-CB), sendo a detecção de alterações nesse gene ou proteína importantes na avaliação da evolução clínica da LMC. O sequenciamento de DNA é descrito como o método capaz de identificar as mutações do gene TP53, sendo, no entanto uma técnica complexa e dispendiosa, o que dificulta seu emprego em larga escala, sendo, atualmente, proposto a pesquisa da proteína p53 por métodos imunológicos e a técnica da reação em cadeia da polimerase seguida pelo estudo do polimorfismo conformacional de fita simples (PCR/SSCP). Métodos: Analisaram-se amostras de 72 pacientes com LMC: 54 de LMC em fase crônica (33 fase inicial ou LMC-FCi e 21 em fase crônica tardia ou LMC-FCtd), 7 em fase acelerada ou LMC-Ac e 11 em crise de blástica (LMC-CB). Foram realizados PCR para os exons 5-9 para posterior estudo pelo SSCP e a expressão de proteína de p53 foi feita por citometria de fluxo. Resultados: Na análise do PCR-SSCP, alterações de mobilidade eletroforética indicativa de mutação do gene de TP53 foi observado em 11/72 pacientes e a expressão da proteína p53 em 17/72 pacientes. O SSCP anormal foi visto em dois casos de LMC-FCi (exon 7), quatro LMC-FCt (um exon 7, um exon 8 e dois exons 8-9), um na LMC-FAc (exon 8) e quatro na LMC-CB (dois no exon 5, um no exon 6 e um no exon 8-9). Neste grupo, a proteína de p53 estava expressa sete casos (todas LMC-CB e AC e 2 LMC-FCtd), havendo correlação estatisticamente significativa entre os resultados dos dois métodos. Conclusões: Estes resultados sugerem que os dois métodos conjuntamente empregados podem aumentar a sensibilidade na detecção de anormalidades do gene e proteína p53 nos pacientes com LMC. A presença de SSCP anormal associado à expressão da proteína de p53 nas fases avançadas desta doença na maioria de casos, sugere que estes exames possam se empregados como indicadores de progressão para a LMC.
The p53 protein play an important role in the control of the cell cycle and DNA repair. In patients with chronic myeloid leukemia (CML) mutation in this gene were found in up to 30%, especially among those in blast crisis. At present, the only widely available technology that reliable detects and defines all mutations is DNA sequencing. However, the routine sequencing of the entire TP53 gene in all cases suggestive of mutation in the laboratorial routine is prohibitively costly, complex, and time consuming. To screen for TP53 abnormalities in CML patients, both p53 protein expression bay immunologic methods and single strand conformation polymorphism of polymerase chain reaction products (SSCP-PCR) is proposed. Methods: We report the results of an analysis of 72 samples from CML patients:54 in chronic phase :33 in initial phase (ICP-CML) and 21 in late phase (LCP-CML), 7 in accelerated phase (AP-CML) and 11in blast crisis (BC-CML). DNA structure for 5-9 exons of the TP53 gene were analyzed by PCR-SSCP and p53 protein expression by flow cytometry (CF). Results: By PCR-SSCP analysis, shifts in eletrophoretic mobility of the TP53 gene were detected in 11 out of CML patients and p53 protein expression in 17 out of 72 CML patients. The abnormal SSCP pattern were showed in two cases of ICP-CML (exon 7), four LCP-CML (one exon 7 and exon 8 and two exons 8-9), one in AP-CML (exon 8) and four in BC-CML (two in exon 5, one in exon 6 and one in exon 8-9). In this group, the p53 protein were express in 17 cases (all CB and AC of CML patients and 2 out of 5 LCP samples of CML patients) and the statistical analysis by qui-square test showed correlation between this two tests. Conclusions: These results suggest that the two methods together can increase the sensibility of screening for p53 abnormalities in CML patients. The presence of abnormal SSCP associated to the p53 protein expression in advanced phases of this disease in the most of cases, suggesting that these tests can be used as an indicator of progression of CML.
Assuntos
Humanos , Citometria de Fluxo , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva , Mutação , Reação em Cadeia da Polimerase , Polimorfismo Genético , Polimorfismo Conformacional de Fita SimplesRESUMO
A toxoplasmose é uma parasitose prevalente em todo o mundo, quando adquirida durante a gestação pode ser transmitida ao feto e causar, entre outros problemas, atraso no desenvolvimento neuropsicomotor, déficit visual e de audição. A prevenção da transmissão vertical deve ser iniciada antes da concepção ou o mais precocemente possível durante o exame pré-natal. Neste trabalho, foi realizado um estudo objetivando a avaliação da soroprevalência da toxoplasmose em parturientes e seus recém-natos (RN),atendidos na Maternidade Escola Januário Cicco da UFRN, através de um estudo comparativo entre as técnicas da hemaglutinação indireta (HAI) e a imunofluorescência indireta (IFI). Paralelamente, também, se procurou padronizar a técnica de IFI, utilizando-se a coleta de sangue capilar com impregnação em papel de filtro. Das amostras sanguíneas de 63 parturientes e respectivos RN avaliadas por IFI, obteve-se uma reatividade para toxoplasmose de 30,2% e de 3,2%, respectivamente. A utilização da IFI empregando-se a coleta de sangue capilar com impregnação em papel de filtro apresentou baixa sensibilidade (71,4%), mostrando a necessidade de se intensificar os estudos para completar a padronização desse método. No entanto, foi observada uma boa correlação entre a IFI e a HAI. Os casos de IFI para cadeia pesada das imunoglobulina humana (IgH) apresentaram elevados títulos para IgG específica na maioria dos casos, sendo que três destes apresentaram reatividade para a IgM. Estes dados mostram a importância da investigação sorológica para toxoplasmose nesse grupo e pacientes
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Gravidez , Recém-Nascido , Adolescente , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo , Recém-Nascido , Gestantes , Estudos Soroepidemiológicos , Toxoplasmose , Toxoplasmose CongênitaRESUMO
Introdução: Treponema pallidun é o agente etiológico da sífilis uma doença sexualmente transmissível. No imunodiagnóstico dessa doença utilizam-se dois diferentes tipos de testes sorológicos. Inicialmente, as amostras são triadas qualitativamente e quantitativamente por um teste não treponêmico como o veneral disease research laboratory (VDRL) e, em seguida, os soros reagentes são testados para a detecção de anticorpos específicos para o treponema pallidun, como a reação de imunofluorescência indireta através do fluorescent treponemal antibory absorption assay (FTA-ABS). Objetivos e Metodologia: Avaliar através do VDRL quantidativo a sororeatividade de 40 pacientes com sífilis e comparar com a presença do fenômeno pro-zona e resultados obtidos pelo FTA-ABS. Resultados e Discussão: Os níveis de reatividade das amostras testadas pelo VDRL variam de 1:2 a 1:256. O fenômeno pró-zona foi observado em 8/40 soros (20) se correlacionando com altos títulos de reatividade na maioria dos casos. O FTA-ABS foi reagente em 39/40 amostras (97,5).