RESUMO
In vitro culture of parasitic helminths provides an important tool to study cell regeneration and physiology, as well as for molecular biology and genetic engineering studies. In the present study, we established in vitro propagation of cells from Echinococcus granulosus germinal cyst layer. E. granulosus germinal cells grew beyond 100 passages and showed no signs of reduced proliferation capacity. Microscopic analysis revealed that cells grew both attached to the substrate and in suspension, forming three-dimensional structures like mammalian stem cell aggregates. Examination of the chromosome number of attached germinal cells showed a high degree of heteroploidy, suggesting the occurrence of transformation during culture. Monolayer cells survived cryopreservation and were able to proliferate after thawing. Based on the characteristics displayed by E. granulosus germinal cells, we establish a cell line from the E. granulosus germinal layer. Furthermore, we propose that this cell line could be useful for drug screening and for obtaining parasite material.
Assuntos
Linhagem Celular , Echinococcus granulosus/citologia , Células Germinativas/crescimento & desenvolvimento , Parasitologia/métodos , Animais , Técnicas de Cultura de Células/métodos , Proliferação de Células , Criopreservação/métodos , MicroscopiaRESUMO
Para comprender el modo de acción de las diferentes drogas antihelmíticas, el objetivo general de este proyecto es analizar el efecto de las mismas en los mecanismos de obtención de energía del parásito en diferentes etapas de su desarrollo. Protoescólices de Eg serán obtenidos a partir de quistes hidatídicos pulmonares o hepáticos de ganado ovino, bovino y humano, serán lavados varias veces comprobándose su vitalidad con tinciones vitales con azul de metileno, y posteriormente distribuidos y mantenidos en tubos Leighton. Parte de los mismos serán inducidos hacia el desarrollo vesicular con el agregado de Medio 199 (suplementados con 20 porciento de suero fetal bovino, glucosa, glutamina y estreptomicina-penicilina) ajustando el pH y gaseando con CO2. De esta manera se establecerá el cultivo in vitro de protoescólices. Estos cultivos serán evaluados morfológicamente y determinado su tiempo de evolución bajo microscopio invertido. También se realizarán estudios en ratones de experimentación inoculados intraperitonealmente con protoescólices de Eg, a partir de los cuales se obtendrán quistes para estudios posteriores. Como el desarrollo de la infección de Eg tiene un curso de 7-8 meses, el laboratorio infecta regular y periódicamente animales, contando permanentemente con material quirúrgico. Los resultados preliminares demuestra que el efecto del FBZ sobre protoescólices aparece en menos tiempo que con otros análogos carbamatos (albendazol ABZ o albendazol sulfóxido -ABZSO). Debido a que el incremento en la vacuolización ocurre en protoescólices tratados con ambos fármacos (FBZ e IVER) y dentro de las 72 hs, cuando se suponen diferentes modos de acción , seguramente ese efecto citopático estaría ocasionado por una situación de estrés generalizado del PTS
Assuntos
Carbono , Echinococcus granulosus , Interações Hospedeiro-Parasita , Bolsas de EstudoRESUMO
Para comprender el modo de acción de las diferentes drogas antihelmíticas, el objetivo general de este proyecto es analizar el efecto de las mismas en los mecanismos de obtención de energía del parásito en diferentes etapas de su desarrollo. Protoescólices de Eg serán obtenidos a partir de quistes hidatídicos pulmonares o hepáticos de ganado ovino, bovino y humano, serán lavados varias veces comprobándose su vitalidad con tinciones vitales con azul de metileno, y posteriormente distribuidos y mantenidos en tubos Leighton. Parte de los mismos serán inducidos hacia el desarrollo vesicular con el agregado de Medio 199 (suplementados con 20 porciento de suero fetal bovino, glucosa, glutamina y estreptomicina-penicilina) ajustando el pH y gaseando con CO2. De esta manera se establecerá el cultivo in vitro de protoescólices. Estos cultivos serán evaluados morfológicamente y determinado su tiempo de evolución bajo microscopio invertido. También se realizarán estudios en ratones de experimentación inoculados intraperitonealmente con protoescólices de Eg, a partir de los cuales se obtendrán quistes para estudios posteriores. Como el desarrollo de la infección de Eg tiene un curso de 7-8 meses, el laboratorio infecta regular y periódicamente animales, contando permanentemente con material quirúrgico. Los resultados preliminares demuestra que el efecto del FBZ sobre protoescólices aparece en menos tiempo que con otros análogos carbamatos (albendazol ABZ o albendazol sulfóxido -ABZSO). Debido a que el incremento en la vacuolización ocurre en protoescólices tratados con ambos fármacos (FBZ e IVER) y dentro de las 72 hs, cuando se suponen diferentes modos de acción , seguramente ese efecto citopático estaría ocasionado por una situación de estrés generalizado del PTS
Assuntos
Echinococcus granulosus , Carbono , Interações Hospedeiro-Parasita , Bolsas de EstudoRESUMO
Para comprender el modo de acción de las diferentes drogas antihelmíticas, el objetivo general de este proyecto es analizar el efecto de las mismas en los mecanismos de obtención de energía del parásito en diferentes etapas de su desarrollo. Protoescólices de Eg serán obtenidos a partir de quistes hidatídicos pulmonares o hepáticos de ganado ovino, bovino y humano, serán lavados varias veces comprobándose su vitalidad con tinciones vitales con azul de metileno, y posteriormente distribuidos y mantenidos en tubos Leighton. Parte de los mismos serán inducidos hacia el desarrollo vesicular con el agregado de Medio 199 (suplementados con 20 porciento de suero fetal bovino, glucosa, glutamina y estreptomicina-penicilina) ajustando el pH y gaseando con CO2. De esta manera se establecerá el cultivo in vitro de protoescólices. Estos cultivos serán evaluados morfológicamente y determinado su tiempo de evolución bajo microscopio invertido. También se realizarán estudios en ratones de experimentación inoculados intraperitonealmente con protoescólices de Eg, a partir de los cuales se obtendrán quistes para estudios posteriores. Como el desarrollo de la infección de Eg tiene un curso de 7-8 meses, el laboratorio infecta regular y periódicamente animales, contando permanentemente con material quirúrgico. Los resultados preliminares demuestra que el efecto del FBZ sobre protoescólices aparece en menos tiempo que con otros análogos carbamatos (albendazol ABZ o albendazol sulfóxido -ABZSO). Debido a que el incremento en la vacuolización ocurre en protoescólices tratados con ambos fármacos (FBZ e IVER) y dentro de las 72 hs, cuando se suponen diferentes modos de acción , seguramente ese efecto citopático estaría ocasionado por una situación de estrés generalizado del PTS