RESUMO

Amblyomin-X is a Kunitz-type serine protease inhibitor (Kunitz-type SPI) designed from the cDNA library of the Amblyomma cajennense tick, which displays in vivo anti-tumor activities. Here, the mechanisms of actions of Amblyomin-X in vascular endothelial growth factor A (VEGF-A)-induced angiogenesis were characterized. Topical application of Amblyomin-X (10 or 100 ng/10 µl; each 48 h) inhibited VEGF-A-induced (10 ng/10 µl; each 48 h) angiogenesis in the dorsal subcutaneous tissue in male Swiss mice. Moreover, similar effect was observed in the VEGF-A-induced angiogenesis in the chicken chorioallantoic membrane (CAM). Additional in vitro assays in t-End cells showed that Amblyomin-X treatment delayed the cell cycle, by maintaining them in G0/G1 phase, and inhibited cell proliferation and adhesion, tube formation and membrane expression of the adhesion molecule platelet-endothelial cell adhesion molecule-1 (PECAM-1), regardless of mRNA synthesis. Together, results herein reveal the role of Kunitz-type SPI on in vivo VEGF-A-induced angiogenesis, by exerting modulatory actions on endothelial cell proliferation and adhesion, especially on membrane expression of PECAM-1. These data provide further mechanisms of actions of Kunitz-type SPI, corroborating their relevance as scientific tools in the design of therapeutic molecules.

Assuntos

Inibidores da Angiogênese/farmacologia , Células Endoteliais/efeitos dos fármacos , Neovascularização Patológica/tratamento farmacológico , Neovascularização Fisiológica/efeitos dos fármacos , Proteínas e Peptídeos Salivares/farmacologia , Inibidores de Serina Proteinase/farmacologia , Fator A de Crescimento do Endotélio Vascular/metabolismo , Inibidores da Angiogênese/genética , Inibidores da Angiogênese/metabolismo , Animais , Proteínas de Artrópodes/genética , Proteínas de Artrópodes/metabolismo , Proteínas de Artrópodes/farmacologia , Adesão Celular/efeitos dos fármacos , Linhagem Celular Transformada , Proliferação de Células/efeitos dos fármacos , Embrião de Galinha , Membrana Corioalantoide/efeitos dos fármacos , Membrana Corioalantoide/metabolismo , Células Endoteliais/metabolismo , Inibidores do Fator Xa , Ixodidae/metabolismo , Masculino , Camundongos , Molécula-1 de Adesão Celular Endotelial a Plaquetas/genética , Molécula-1 de Adesão Celular Endotelial a Plaquetas/metabolismo , Proteínas Recombinantes/metabolismo , Proteínas Recombinantes/farmacologia , Fase de Repouso do Ciclo Celular/efeitos dos fármacos , Proteínas e Peptídeos Salivares/genética , Proteínas e Peptídeos Salivares/metabolismo , Tela Subcutânea/efeitos dos fármacos , Tela Subcutânea/metabolismo