RESUMO
CD4+ T follicular helper cells (TFH) were assessed in adult patients with common variable immune deficiency (CVID) classified according to the presence of granulomatous disease (GD), autoimmunity (AI), or both GD and AI (Group I) or the absence of AI and GD (Group II). TFH lymphocytes were characterized by expression of CXCR5 and PD-1. TFH were higher (in both absolute number and percentage) in Group I than in Group II CVID patients and normal controls (N). Within CXCR5+CD4+ T cells, the percentage of PD-1 (+) was higher and that of CCR7 (+) was lower in Group I than in Group II and N. The percentages of Treg and TFH reg were similar in both CVID groups and in N. TFH responded to stimulation increasing the expression of the costimulatory molecules CD40L and ICOS as did N. After submitogenic PHA+IL-2 stimulation, intracellular expression of TFH cytokines (IL-10, IL-21) was higher than N in Group I, and IL-4 was higher than N in Group II. These results suggest that TFH are functional in CVID and highlight the association of increased circulating TFH with AI and GD manifestations.
Assuntos
Imunodeficiência de Variável Comum/imunologia , Regulação da Expressão Gênica/imunologia , Doença Granulomatosa Crônica/imunologia , Linfócitos T Auxiliares-Indutores/imunologia , Linfócitos T Reguladores/imunologia , Adulto , Idoso , Autoimunidade , Ligante de CD40/genética , Ligante de CD40/imunologia , Estudos de Casos e Controles , Imunodeficiência de Variável Comum/complicações , Imunodeficiência de Variável Comum/genética , Imunodeficiência de Variável Comum/patologia , Feminino , Doença Granulomatosa Crônica/complicações , Doença Granulomatosa Crônica/genética , Doença Granulomatosa Crônica/patologia , Humanos , Proteína Coestimuladora de Linfócitos T Induzíveis/genética , Proteína Coestimuladora de Linfócitos T Induzíveis/imunologia , Interleucina-10/genética , Interleucina-10/imunologia , Interleucina-2/farmacologia , Interleucina-4/genética , Interleucina-4/imunologia , Interleucinas/genética , Interleucinas/imunologia , Contagem de Linfócitos , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Fito-Hemaglutininas/farmacologia , Cultura Primária de Células , Receptor de Morte Celular Programada 1/genética , Receptor de Morte Celular Programada 1/imunologia , Receptores CCR7/genética , Receptores CCR7/imunologia , Receptores CXCR5/genética , Receptores CXCR5/imunologia , Transdução de Sinais , Linfócitos T Auxiliares-Indutores/efeitos dos fármacos , Linfócitos T Auxiliares-Indutores/patologia , Linfócitos T Reguladores/efeitos dos fármacos , Linfócitos T Reguladores/patologiaRESUMO
En este trabajo se describe un sistema para evaluar y caracterizar los anticuerpos anti-FVIII en pacientes con Hemofilia A Severa (HAS) que reciben el Factor como tratamiento de sustitución. Consiste en el empleo combinado de microesferas y Citometria de Flujo (CF). El rFVIII fue acoplado a microesferas de 2 µm de diámetro (m-FVIII) las cuales se incubaron con diluciones de plasma o suero de pacientes con (n=13) o sin (n=17) inhibidor, pacientes en Tratamiento Inmunotolerante (TIT)(n=5) y dadores normales (N) (n=12). Los anticuerpos se revelaron con anti-lgG humana, anti-lgG1, anti-lgG2, anti-IgG3 o anti-lgG4 biotiniladas, seguido por streptavidina-ficoeritrina. Se registraron los valores de Intensidad de Fluorescencia Media (IFM). Microesferas sin FVIII (m-Control) se utilizaron como control. El resultado se expresó como índice: (IFM de m-FVIII/IFM de m-Control) multiplicado por la inversa de la dilución de máxima respuesta. Se determinó el porcentaje de contribución de cada subclase de IgG. Los resultados presentaron un 86 por ciento de concordancia con la prueba de Bethesda y un 80 por ciento con ELISA. El método fue útil para el seguimiento de los pacientes durante el TIT. La IgG4 prevaleció en pacientes con alto título y al comienzo del TIT. La CF es fácil y rápida y requiere sólo 200 µl de muestra.
In this study, a Flow Cytometry (FC) system is described for detecting and characterizing antibodies (inhibitors) to Factor VIII (FVIII) in Severe Haemophilia A (SHA) patients following FVIII infusion. A combination of microspheres and Flow Cytometry (FC) was employed. First, rFVIII was coupled to microspheres of 2 µm of diameter (m-FVIII). Then, they were reacted with dilutions of plasma or serum of patients with (n=13) or without (n=17) inhibitors. Five patients receiving Immunotolerant Treatment (ITI) and 12 normal donors were included. Microspheres without rFVIII were used as control (m-Control). Captured anti-FVIII antibodies were detected using biotinylated anti-Human IgG, IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4 followed by streptavidin-phycoerythrin. FC analysis was performed recording Mean Fluorescence Intensity (MFI). Results were given as an Index: the highest MFI ratio between m-FVIII and m-Control multiplied by the inverse of the corresponding plasma dilution. The contribution of each IgG subclass was expressed as percentage. FC results had 86 per cent and 80 per cent of coincidence with the Bethesda method and ELISA respectively. The test was useful to measure anti-FVIII antibodies during the ITI. IgG4 was the prevalent IgG subclass in patients with high level of inhibitors and previously to ITI. FC was easy, fast and requires only 200 µl of sample.
Assuntos
Humanos , Fator VIII/imunologia , Fator VIII/uso terapêutico , Hemofilia A/imunologia , Hemofilia A/tratamento farmacológico , Autoanticorpos/imunologia , Citometria de Fluxo/métodos , Doença Aguda , Epitopos/imunologia , Seguimentos , Imunoensaio/métodos , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Sensibilidade e EspecificidadeRESUMO
Antecedentes: los antiinflamatorios no esteroides (AINE) producen mayoritariamente reacciones pseudoalérgicas, es decir no mediadas por IgE. Distintos mecanismos de secreción se han propuesto para reacciones alérgicas y anafilactoideas. Objetivos: comparar los resultados de la activación de basófilos en presencia de diclofenac por medio de microscopia óptica (test de degranulación de basófilos (Ba humanos, TDBH) y citometría de flujo (CF) (TAB) en pacientes sensibles a aspirina, a fin de poder sugerir un posible mecanismo de activación. Métodos: el TDBH se realizó mediante coloración con azul de toluidina en células mononucleares. Para el TAB se utilizaron la marcación con anti-IgE/anti-CD45 para identificar los Ba y la expresión de CD63 para evaluar la activación. Se registró el porcentaje de Ba activados en cada caso después de la estimulación con la droga. Se investigó la respuesta a 1 µg/mL y 10 µg/mL de diclofenac en 8 pacientes con historia clínica de sensibilidad a aspirina y en 8 controles. La estimulación con fMLP fue el control positivo de la reacción. Resultados: 8/8 pacientes presentaron TDBH positivo para ambas dosis de diclofenac (X ± DE:42,6 ± 14,6 por ciento para 1µg/mL; y 45,65 ± 14,3 por ciento para 10 µg/mL) con diferencias significativas respecto del grupo control (X ± DE: 10,23 ± 3,36 por ciento y 17,74 ± 6,49 por ciento para 1 y 10 µg/mL, respectivamente). El TAB fue negativo en 7/8 pacientes pero 1/8 tuvo una respuesta leve (7,2 por ciento). Los porcentajes de Ba activados después de la estimulación con fMLP fueron similares en ambos grupos estudiados y con ambas técnicas empleadas. Conclusión: los AINE inducen, en pacientes sensibles, degranulación de Ba a través de mecanismos diversos que pueden o no incluir la extrusión de los gránulos citoplasmáticos
Assuntos
Humanos , Anti-Inflamatórios não Esteroides , Basófilos , Degranulação Celular , Diclofenaco , Hipersensibilidade a Drogas , Anti-Inflamatórios não Esteroides , Antígenos CD , Aspirina , Diclofenaco , Hipersensibilidade a Drogas , ExocitoseRESUMO
Antecedentes: los antiinflamatorios no esteroides (AINE) producen mayoritariamente reacciones pseudoalérgicas, es decir no mediadas por IgE. Distintos mecanismos de secreción se han propuesto para reacciones alérgicas y anafilactoideas. Objetivos: comparar los resultados de la activación de basófilos en presencia de diclofenac por medio de microscopia óptica (test de degranulación de basófilos (Ba humanos, TDBH) y citometría de flujo (CF) (TAB) en pacientes sensibles a aspirina, a fin de poder sugerir un posible mecanismo de activación. Métodos: el TDBH se realizó mediante coloración con azul de toluidina en células mononucleares. Para el TAB se utilizaron la marcación con anti-IgE/anti-CD45 para identificar los Ba y la expresión de CD63 para evaluar la activación. Se registró el porcentaje de Ba activados en cada caso después de la estimulación con la droga. Se investigó la respuesta a 1 Ag/mL y 10 Ag/mL de diclofenac en 8 pacientes con historia clínica de sensibilidad a aspirina y en 8 controles. La estimulación con fMLP fue el control positivo de la reacción. Resultados: 8/8 pacientes presentaron TDBH positivo para ambas dosis de diclofenac (X ± DE:42,6 ± 14,6 por ciento para 1Ag/mL; y 45,65 ± 14,3 por ciento para 10 Ag/mL) con diferencias significativas respecto del grupo control (X ± DE: 10,23 ± 3,36 por ciento y 17,74 ± 6,49 por ciento para 1 y 10 Ag/mL, respectivamente). El TAB fue negativo en 7/8 pacientes pero 1/8 tuvo una respuesta leve (7,2 por ciento). Los porcentajes de Ba activados después de la estimulación con fMLP fueron similares en ambos grupos estudiados y con ambas técnicas empleadas. Conclusión: los AINE inducen, en pacientes sensibles, degranulación de Ba a través de mecanismos diversos que pueden o no incluir la extrusión de los gránulos citoplasmáticos (AU)
Assuntos
Humanos , Hipersensibilidade a Drogas/fisiopatologia , Diclofenaco/efeitos adversos , Degranulação Celular , Basófilos/efeitos dos fármacos , /efeitos adversos , Diclofenaco , Aspirina , Hipersensibilidade a Drogas/etiologia , Diclofenaco/farmacologia , Antígenos CD , Exocitose , /farmacologiaRESUMO
Recent advances on the pathogenesis of chronic urticaria have defined a group of patients with autoantibodies directed to the IgE or to the alpha chain of the Fc high affinity receptor of IgE, Fc epsilon RI alpha. These antibodies are detected in vivo through the autologous serum test (AST) and in vitro with a variety of techniques. We here describe 37 patients with chronic urticaria, 28 female and 9 male, with a f/m ratio of 3.1. Mean age at onset was 36.5 years (range 16-78). AST was positive in 25 (68%) of 37 patients. Serum induced a wheal significantly larger than plasma (122 +/- 78 mm2 vs 57 +/- 66 mm2, p < 0.05). Median persistence of the chronic urticaria, estimated by Kaplan-Meyer analysis, was 437 days, with no difference between AST(+) and AST(-) patients (437 vs. 369, p = 0.18). Mean IgE concentration was 157 +/- 173 IU/mL, as expected in an unselected population. Basophil count was lower in patients compared with controls (17 +/- 12 cel/microL vs. 43 +/- 27 cel/microL, p < 0.008). Only sera from 2/7 (28.6%) patients AST (+) and very low basophil count consistently induced expression of CD63. This effect was abrogated in non-releasing basophils, confirming the presence of antibodies directed to the Fc epsilon RI alpha-IgE. We conclude that functional antibodies are present in only a minority of patients and that their identification does not predict the outcome.
Assuntos
Autoanticorpos/imunologia , Basófilos/imunologia , Urticária/imunologia , Adolescente , Adulto , Idoso , Agranulocitose/imunologia , Antígenos CD/análise , Autoanticorpos/análise , Basófilos/citologia , Doença Crônica , Feminino , Seguimentos , Humanos , Imunoglobulina E/sangue , Contagem de Leucócitos , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Glicoproteínas da Membrana de Plaquetas/análise , Receptores de IgE/imunologia , Tetraspanina 30 , Urticária/sangueRESUMO
Recent advances on the pathogenesis of chronic urticaria have defined a group of patients with autoantibodies directed to the IgE or to the alpha chain of the Fc high affinity receptor of IgE, Fc epsilon RI alpha. These antibodies are detected in vivo through the autologous serum test (AST) and in vitro with a variety of techniques. We here describe 37 patients with chronic urticaria, 28 female and 9 male, with a f/m ratio of 3.1. Mean age at onset was 36.5 years (range 16-78). AST was positive in 25 (68%) of 37 patients. Serum induced a wheal significantly larger than plasma (122 +/- 78 mm2 vs 57 +/- 66 mm2, p < 0.05). Median persistence of the chronic urticaria, estimated by Kaplan-Meyer analysis, was 437 days, with no difference between AST(+) and AST(-) patients (437 vs. 369, p = 0.18). Mean IgE concentration was 157 +/- 173 IU/mL, as expected in an unselected population. Basophil count was lower in patients compared with controls (17 +/- 12 cel/microL vs. 43 +/- 27 cel/microL, p < 0.008). Only sera from 2/7 (28.6%) patients AST (+) and very low basophil count consistently induced expression of CD63. This effect was abrogated in non-releasing basophils, confirming the presence of antibodies directed to the Fc epsilon RI alpha-IgE. We conclude that functional antibodies are present in only a minority of patients and that their identification does not predict the outcome
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adolescente , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Autoanticorpos , Basófilos , Urticária , Antígenos CD , Autoanticorpos , Basófilos , Doença Crônica , Seguimentos , Hipersensibilidade Imediata , Contagem de Leucócitos , Receptores de IgE , Testes Cutâneos , UrticáriaRESUMO
Recent advances on the pathogenesis of chronic urticaria have defined a group of patients with autoantibodies directed to the IgE or to the alpha chain of the Fc high affinity receptor of IgE, Fc epsilon RI alpha. These antibodies are detected in vivo through the autologous serum test (AST) and in vitro with a variety of techniques. We here describe 37 patients with chronic urticaria, 28 female and 9 male, with a f/m ratio of 3.1. Mean age at onset was 36.5 years (range 16-78). AST was positive in 25 (68
) of 37 patients. Serum induced a wheal significantly larger than plasma (122 +/- 78 mm2 vs 57 +/- 66 mm2, p < 0.05). Median persistence of the chronic urticaria, estimated by Kaplan-Meyer analysis, was 437 days, with no difference between AST(+) and AST(-) patients (437 vs. 369, p = 0.18). Mean IgE concentration was 157 +/- 173 IU/mL, as expected in an unselected population. Basophil count was lower in patients compared with controls (17 +/- 12 cel/microL vs. 43 +/- 27 cel/microL, p < 0.008). Only sera from 2/7 (28.6
) patients AST (+) and very low basophil count consistently induced expression of CD63. This effect was abrogated in non-releasing basophils, confirming the presence of antibodies directed to the Fc epsilon RI alpha-IgE. We conclude that functional antibodies are present in only a minority of patients and that their identification does not predict the outcome.
RESUMO
Recent advances on the pathogenesis of chronic urticaria have defined a group of patients with autoantibodies directed to the IgE or to the alpha chain of the Fc high affinity receptor of IgE, Fc epsilon RI alpha. These antibodies are detected in vivo through the autologous serum test (AST) and in vitro with a variety of techniques. We here describe 37 patients with chronic urticaria, 28 female and 9 male, with a f/m ratio of 3.1. Mean age at onset was 36.5 years (range 16-78). AST was positive in 25 (68%) of 37 patients. Serum induced a wheal significantly larger than plasma (122 +/- 78 mm2 vs 57 +/- 66 mm2, p < 0.05). Median persistence of the chronic urticaria, estimated by Kaplan-Meyer analysis, was 437 days, with no difference between AST(+) and AST(-) patients (437 vs. 369, p = 0.18). Mean IgE concentration was 157 +/- 173 IU/mL, as expected in an unselected population. Basophil count was lower in patients compared with controls (17 +/- 12 cel/microL vs. 43 +/- 27 cel/microL, p < 0.008). Only sera from 2/7 (28.6%) patients AST (+) and very low basophil count consistently induced expression of CD63. This effect was abrogated in non-releasing basophils, confirming the presence of antibodies directed to the Fc epsilon RI alpha-IgE. We conclude that functional antibodies are present in only a minority of patients and that their identification does not predict the outcome (AU)
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adolescente , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Idoso , RESEARCH SUPPORT, NON-U.S. GOVT , Autoanticorpos/imunologia , Basófilos/imunologia , Urticária/imunologia , Autoanticorpos/análise , Basófilos/citologia , Doença Crônica , Urticária/sangue , Contagem de Leucócitos , Antígenos CD , Receptores de IgE/imunologia , Testes Cutâneos/métodos , Hipersensibilidade Imediata/sangue , SeguimentosRESUMO
Se estudió por citometría de flujo la expansión de un clon HPN durante una crisis hemolítica en una paciente con anemia aplásica (AA) de 18 años de evolución. Cuando las pruebas de Ham y Sacarosa fueron positivas (día 0) estaban disminuidos los niveles de hemoglobina y los recuentos de eritrocitos y leucocitos. Estos descensos se fueron acentuando hasta el último día del estudio (día 24). Durante este período los niveles de LDH, bilirrubina indirecta y reticulocitos se mantuvieron elevados. El clon HPN se investigó evaluando la expresión de CD55 y CD59 sobre los eritrocitos. Las células de la paciente presentaron una menor intensidad de fluorescencia para CD55 respecto del control normal. Con la marcación con anti CD59 se detectó la presencia de dos poblaciones de hematíes: HPN I, con fluorescencia positiva semejante a la de la población normal y HPN III, con fluorescencia negativa, correspondiente al clon HPN. El porcentaje de la población HPN III se incrementó de 52 por ciento (días 0 y 7) a 70 por ciento (día 24). Las proteínas de la membrana leucocitaria también se encontraron afectadas (CD14 ausente y CD16 disminuida). El análisis global de los datos reveló una buena correlación entre la observación clínica, la evolución de los valores del laboratorio y la expansión del clon.
Assuntos
Humanos , Feminino , Adulto , Anemia Aplástica , Eritrócitos , Citometria de Fluxo , Hemoglobinúria Paroxística , Glicoproteínas de Membrana , Anemia Aplástica , Anemia Hemolítica , Antígenos CD55 , Antígenos CD59 , Células Clonais , Hemoglobinúria Paroxística , Leucócitos , Proteínas de MembranaRESUMO
Se estudió por citometría de flujo la expansión de un clon HPN durante una crisis hemolítica en una paciente con anemia aplásica (AA) de 18 años de evolución. Cuando las pruebas de Ham y Sacarosa fueron positivas (día 0) estaban disminuidos los niveles de hemoglobina y los recuentos de eritrocitos y leucocitos. Estos descensos se fueron acentuando hasta el último día del estudio (día 24). Durante este período los niveles de LDH, bilirrubina indirecta y reticulocitos se mantuvieron elevados. El clon HPN se investigó evaluando la expresión de CD55 y CD59 sobre los eritrocitos. Las células de la paciente presentaron una menor intensidad de fluorescencia para CD55 respecto del control normal. Con la marcación con anti CD59 se detectó la presencia de dos poblaciones de hematíes: HPN I, con fluorescencia positiva semejante a la de la población normal y HPN III, con fluorescencia negativa, correspondiente al clon HPN. El porcentaje de la población HPN III se incrementó de 52 por ciento (días 0 y 7) a 70 por ciento (día 24). Las proteínas de la membrana leucocitaria también se encontraron afectadas (CD14 ausente y CD16 disminuida). El análisis global de los datos reveló una buena correlación entre la observación clínica, la evolución de los valores del laboratorio y la expansión del clon. (AU)