RESUMO
Introducción: El polimorfismo de un solo nucleótido (SNP) rs12979860 en el gen IL28B del cromosoma 19 que codifica al interferón (IFN)-λ-3, se asocia con respuesta viral sostenida a la terapia combinada de IFN-α pegilado y ribavirina en pacientes con virus de hepatitis C (VHC) genotipo 1. La diferencia alélica de este polimorfismo difiere entre grupos étnicos. Objetivo: Comparar las frecuencias alélicas (FA) y genotípicas (FG) del SNP rs12979860 del gen IL28B entre individuos sanos y pacientes con VHC mestizos venezolanos. Material y métodos: De 34 pacientes con VHC genotipo 1 investigados para este polimorfismo, solamente 19 eran venezolanos de tercera generación, a quienes comparamos con 19 individuos sanos conocidos mestizos. La determinación del polimorfismo se realizó mediante el ensayo TaqMAN SNP empleando el sistema de PCR-tiempo real. Resultados: El alelo más prevalente en la población sana fue el alelo silvestre C (55%) y en los pacientes la frecuencia fue igual para el alelo C y para el alelo mutado T (50%) sin diferencia significativa entre las dos poblaciones. El genotipo predominante fue el heterocigoto (C/T) en pacientes y en controles (80% y 58%) evidenciándose mayor valor en el primer grupo pero no llegando a ser significativo. Predominando en controles vs pacientes se aprecian los genotipos homocigotos C/C (26% vs 10%) y T/T (16% vs 10%). Conclusión: La tendencia preliminar apunta al genotipo heterocigoto C/T del gen IL28B como el más frecuente en la población mestiza venezolana.
Introduction: Single-nucleotide polymorphism (SNP) rs12979860 in the region of the IL28B gene on chromosome 19, coding for the interferon (IFN)-λ-3 are associated with sustained viral response to combined therapy with pegylated IFN-α and ribavirin in patients with hepatitis C virus (HCV) genotype 1. Allelic difference from this polymorphism varies among ethnic groups. Objective: To compare allelic frequencies (AF) and genotypes frequencies (GF) of SNP rs12979860 of the IL28B gene between healthy individuals and mestizos Venezuelan HCV patients. Material and Methods: From 34 patients with HCV genotype 1 investigated for this polymorphism only 19 were third generation mestizo Venezuelan patients who were compared to 19 healthy individuals known mestizos. SNP determination was carried-out by TaqMAN SNP assay employing real-time PCR system. Results: Most prevalent allele in the healthy population was the C wild (55%) while in patients similar frequency was found for C allele or the mutant allele (50% each) with no significant difference. The heterozygote genotype (C/T) was predominant in patients and controls (80% and 58%) with a higher value for the former group but without significance. Homozygote genotypes were more prevalent in controls vs. patients: C/C (26% vs. 10%) and T/T (16% vs. 10%). Conclusion: Preliminary tendency points-out that heterozygote genotype C/T from the IL28B gene is the most frequent in the Venezuelan mestizo population.
RESUMO
Introducción: Un evento inmunopatológico característico en la hepatitis autoinmune (HAI) es la activación prolongada de la respuesta Th1. Diferentes promotores genéticos pueden predisponer a esta activación provocando ruptura de la inmunotolerancia. Uno de estos promotores es ICOS perteneciente a la familia de CD28, moléculas involucradas en funciones que regulan las respuestas Th1 y Th2 previniendo la activación prolongada de la respuesta Th1. Objetivo: Determinar el polimorfismo del gen ICOS (c.1564 T/C) en pacientes mestizos venezolanos con HAI tipo 1 y su posible asociación con la expresión clínica. Materiales y Métodos: Se investigaron 70 pacientes con HAI tipo 1 y 121 individuos sanos, ambos grupos venezolanos de tercera generación. La determinación del polimorfismo se realizó mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) seguida por polimorfismos en la longitud de los fragmentos de restricción (RFLP). Resultados: El alelo silvestre T fue el más frecuente tanto en pacientes como en controles siendo mayor en el segundo grupo (60,7% vs 70,4%; p=0,05; pc=ns OR 1,45 p<0,05). El alelo mutado C se observó más en los pacientes con respecto al grupo control (39,3% vs 29,6%; p=0,05; pc=ns OR 1,45 (p<0,05). En las frecuencias genotípicas, se demostraron los genotipos heterocigotos (T/C) y homocigotos para el alelo mutado (C/C) más prevalentes en el grupo de pacientes que en controles y el genotipo silvestre T/T más frecuente en controles que en pacientes siendo estas diferencias significativas al 10% (χ2=5,31;2GL;p=0,07); OR 2,08 (p<0,05). Los pacientes con el genotipo heterocigoto demostraron niveles más elevados de globulinas, de IgG y mayor presencia de anticuerpos anti-mitocondriales que los observados en el genotipo T/T con diferencia estadística significativa al 10%. Además, se observa menor presencia de anticuerpos antinucleares en el genotipo T/C vs. T/T (p<0,10; pc=ns). Conclusiones: En el estudio del polimorfismo del gen ICOS (c.1564 T/C) los genotipos heterocigoto T/C y homocigoto mutado C/C son más frecuentes en pacientes mestizos venezolanos con HAI tipo 1 que en controles con riesgo significativo. Este polimorfismo se asocia a ciertas variables inmunodiagnósticas.
Introduction: A characteristic immunopathological event in autoinmune hepatitis (AIH) type 1 is the prolonged activation of Th1 response. Different promoters might predispose to this activation inducing immunotolerance breaking. ICOS is one of these promoters which belong to CD28 family, molecules involved in Th1 and Th2 regulating functions to prevent Th1 longer activation. Objective: To determine gen ICOS (c.1564 T/C) polymorphism in Venezuelan mestizo patients with AIH type 1 and its possible association with clinical expression. Materials and Methods: Seventy patients with AIH type 1 and 121 healthy individuals, both third generation Venezuelan groups, were investigated. Polymorphism determination was performed by polymerase chain reaction (PCR) following by restriction fragments longitudinal polymorphisms (RFLP). Results: The most frequent allele was wild T either in patients and controls, being higher in the second group (60,7% vs. 70,4%; p=0,05; pc=ns OR 1,45 p<0,05). The mutant C allele was observed more in patients than controls (39,3% vs. 29,6%; p=0,05; pc=ns OR 1,45 (p<0,05). In the genotypes frequencies, heterozygote genotypes (T/C) and homozygote mutant allele (C/C) were prevalent in the patients group while in the control´s group the wild genotype T/T was the most frequent being these differences significantly to 10% (χ2=5,31;2GL;p=0,07); OR 2,08 (p<0,05). Compared to the T/T genotype group, patients with heterozygote genotype shown higher levels of globulins, IgG and presence of anti-mithocondrial antibodies with a significant difference to 10%. Moreover, presence of antinuclear antibodies was less frequent in the T/C genotype vs. T/T (p<0,10; pc=ns). Conclusion: Heterozygote genotype T/C and homozygote mutant genotype C/C of gen ICOS (c.1564 T/C) with a significantly risk are more frequent in Venezuelan mestizo patients with AIH type 1 than in controls with a significantly risk. This polymorphism is associated with certain immunodiagnostic variables.
RESUMO
Natural killer T (NKT) cells represent an heterogeneous T cell population involved in host immunity against several microorganisms. They also have important immunoregulatory functions. Studies on circulating levels of NKT cells during HCV infection have been focused on the invariant NKT (iNKT) subset which recognizes the non-classical Ag-presenting molecule CD1d, with little information about the non-invariant NKT (non-iNKT) cell subset. In the present study, we assessed the number of both NKT cells subsets and the surface expression of CD1a, b, c and d isoforms in peripheral blood of 31 HCV-infected patients and 31 ages matched healthy individuals. A significant increase of circulating non-iNKT cells was observed in HCV-infected patients as compared to controls (74 ± 57 cells/µL vs 42 ± 16 cells/µL respectively, p<0.0042) with no differences in the iNKT subset. In addition, the percentage of CD1a, CD1c and CD1d-expressing leukocytes was significantly low in patients as compared to controls. These findings suggest that both components, non-iNKT cells and CD1 molecules expression are involved in the control of natural immunity against HCV.
Assuntos
Antígenos CD1/imunologia , Hepacivirus/imunologia , Hepatite C Crônica/imunologia , Células T Matadoras Naturais/imunologia , Adulto , Algoritmos , Antígenos CD1/sangue , Biomarcadores/sangue , Estudos de Casos e Controles , Feminino , Citometria de Fluxo , Genótipo , Hepatite C Crônica/sangue , Hepatite C Crônica/epidemiologia , Humanos , Leucócitos/imunologia , Masculino , Microscopia Confocal , Pessoa de Meia-Idade , Pacientes Ambulatoriais/estatística & dados numéricos , Prevalência , Venezuela/epidemiologiaRESUMO
Introducción: La Hepatitis Autoinmune (HAI) tipo 1 es una enfermedad hepática progresiva en la cual se demuestra susceptibilidad genética asociada a determinantes compartidos de moléculas HLA clase II. Sin embargo, 30 a 50% de estos pacientes, no asocian alelos HLA de susceptibilidad por lo que otros promotores genéticos que pudiesen predisponer a la ruptura de inmunotolerancia están siendo investigados. La Proteína Linfoide Tirosina Fosfatasa (LYP) codificada por el gen PTPN22, ejerce una potente inhibición en el linfocito T activado. El polimorfismo de este gen en la posición 1858 (sustitución de citosina (C) por una timina (T)) se describe asociada a múltiples patologías autoinmunes pero aún no se ha reportado en HAI tipo 1. Objetivo: Determinar la posible asociación del polimorfismo del gen PTPN22 en mestizos venezolanos con HAI tipo 1. Material y Métodos: Nuestra población consistió de 62 pacientes con HAI tipo 1 y 107 individuos sanos, ambos grupos venezolanos de tercera generación. La determinación del polimorfismo se realizó mediante la amplificación de la región en estudio (posición 1850 del codón 620) con la técnica de PCR estandarizada seguida por digestión de enzimas de restricción (Xcm I). Resultados: El genotipo más frecuente fue el genotipo homocigoto silvestre (C/C) tanto en pacientes (90.3%) como en controles (98.1%,) sin diferencia significativa. El polimorfismo C1858T (genotipo C/T) del gen PTP22 se identificó con mas frecuencia en los pacientes con diferencia estadísti-camente signifi cativa al relacionarlo con el grupo control (p= 0.029, OR=5,6). El genotipo homocigoto TT no se observó en ninguno de los individuos estudiados. Conclusión: El polimorfismo del gen PTPN22 a nivel C1858T descrito en otras enfermedades de origen au-toinmune también se detecta en HAI tipo 1, probable-mente confiriendo susceptibilidad a esta enfermedad en la población mestiza venezolana.
Background: Autoimmune hepatitis (AIH) type 1 is a progressive inflammatory disorder of the liver with genetic association to human leukocyte antigens. How-ever, the genetic background of AIH type 1 is considered to be polygenic. Lymphoid tyrosine phosphatase, encoded by the PTPN22 gene, exerts an important down regulatory effect on T cell activation in immune response. The single nucleotide polymorphism C1858T within the PTPN22 gene has been associated with in-creased susceptibility to a number of autoimmune dis-orders. Objective: The aim of this study was to assess the association of the single nucleotide polymorphism C1858T of the PTPN22 gene in Venezuelan Mestizos patients with AIH type 1. Materials and Methods: 62 Venezuelan Mestizos patients with AIH type 1 and 107 healthy volunteers were investigated. Cases and controls were genotyped for C1858T polymorphism by restriction fragment length polymorphism analysis of PCR products. Results: The wild-type C/C homozygous genotype was the most common variant in both patients (90.3 %) and controls (98.1 %). The heterozygous genotype C/T was significantly found in AIH patients compared to controls (OR = 5.6, P = 0.029). The T/T homozygous mutant genotype was not observed in either population. Conclusions: These results suggest that the PTPN22 1858C/T genotype could confer differential susceptibility to AIH type 1 in Venezuelan Mestizos patients. In addition, these findings provide strong evidence that lymphoid tyrosine phosphatase could be a critical player in multiple autoimmune disorders.
Assuntos
Humanos , Masculino , Adulto , Hepatite Autoimune/diagnóstico , Hepatite Autoimune/genética , Hepatite Autoimune/virologia , Linfócitos T , DNA , Gastroenterologia , Sistema ImunitárioRESUMO
Hepatitis B virus (HBV) has been classified into 8 genotypes (A-H). Genotypes A, D and F have been identified in some South American countries, but in Venezuela studies have been more restricted to aboriginal communities where genotype F is predominant. The aim of the present study was to identify the prevalence of HBV genotypes among native HBsAg carriers in Venezuelan urban areas. In addition, we correlated the predominant HBV genotype with epidemiological, serological and virological features of the infection. Non-Venezuelan migrant patients were excluded from this study. Serum samples from 90 patients (21 children and 69 adults) with chronic hepatitis B (CHB) were analyzed. Seventy-four patients had CHB e-antigen positive and 16 CHB e-antigen negative. HBV DNA serum levels of the whole group ranged from 4.1 to 8.8 log10 IU/mL. Patients with CHB e-antigen positive showed significantly higher viral loads (P = 0.0001) than the group with CHB e-antigen negative. Eighty-eight patients (97.8%) exhibited HBV genotype F while two non-related patients (2.2%) were infected with A + F genotypes. Genotype F is the main circulating HBV strain among HBsAg carriers from Venezuelan urban areas. This genotype is associated mostly with CHB eantigen positive and high rate of transmission. Progression to cirrhosis and hepatocellular carcinoma could be major clinical events of this patient population independently of age at acquisition or transmission route.
Assuntos
Vírus da Hepatite B/genética , Hepatite B Crônica/diagnóstico , População Urbana , Adolescente , Adulto , Distribuição por Idade , Biomarcadores/sangue , Criança , Pré-Escolar , DNA Viral/sangue , Feminino , Genótipo , Antígenos de Superfície da Hepatite B/sangue , Antígenos E da Hepatite B/sangue , Vírus da Hepatite B/imunologia , Hepatite B Crônica/epidemiologia , Humanos , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Prevalência , Prognóstico , População Urbana/estatística & dados numéricos , Venezuela/epidemiologia , Carga ViralRESUMO
Se han reportado cambios en la distribución y frecuencia de los genotipos del virus de hepatitis C (VHC) en algunos países, incluyendo a Venezuela. Analizamos la frecuencia del VHC en nuestro país evaluando un posible cambio en la frecuencia de los genotipos a nivel nacional. Ochocientas nueve muestras de suero de pacientes infectados por VHC provenientes de Caracas y de 11 estados venezolanos, fueron investigadas mediante PCR-RLFP. En 527 identificamos el genotipo 1 (65,1%), 34,4% de los pacientes mostraron genotipo 2 mientras genotipos 3, 4 y 5 fueron altamente infrecuentes. De 316 pacientes infectados con genotipo 1, el 56% mostró dinteles de ARN VHC <600.000 UI/mL y 44% viremia mayor que este dintel. Demostramos que la frecuencia de los genotipos del VHC permanece inalterada en Venezuela, con predominio del genotipo 1b y cerca de la mitad con carga viral elevada.
Changes in hepatitis C virus (HCV) genotypes distribution and frequency have been reported in some countries including Venezuela. We analyze the frequency of the HCV genotypes in our country evaluating a possible distribution change at national level. Eight hundred and nine sera of patients infected by HCV coming from Caracas and of 11 Venezuelan states were investigated by means of PCR-RFLP. In 527 sera we identified the genotype 1 (65.1%), 34.4% showed genotype 2 while genotypes 3, 4 nd 5 were highly uncommon. Of 316 patients infected with genotype 1, 56% showed levels of HCV RNA < 600.000 IU/mL and 44% levels superior to this cut-off. We demonstrate that the distribution and frequency of HCV genotypes remains unaffected in Venezuela, with prevalence of the genotype 1b and near the half with high viral load.
Assuntos
Humanos , Genótipo , Hepatite C , Vírus de RNARESUMO
De acuerdo a consensos científicos a nivel internacional el objetivo primordial en el tratamiento de la hepatitis crónica B (HCB) es actualmete lograr la supresión de la replicación viral de manera potente y en el menor tiempo posible. A continuación presentamos la experiencia clínica acumulada en Venezuela empleando el análogo nucleosido telbivudina en pacientes con HCB. Se analizaron 29 portadores con HCB, promedio de edad 44±17 años, con una proporción 2/1 sexo masculino/sexo femenino, 23 con HCB antígeno e positivo y 6 con HCB antígeno e negativo. Las variables escogidas de evaluación fueron la viremia (ADN VHB), el valor de ALT y la tolerancia al tratamiento. Durante un período promedio de tratamiento de 7,3 meses cada paciente recibió 600 mg diarios de telbivudina. 86,2% de ellos disminuyó significativamente la carga circulante de ADN VHB de 7,3±1,2 log10 copias/mL a 1,9±1,0 log10 copias/mL (p= 0,0001). Adicionalmente, se demostró disminución significativa de los valores de ALT, de un promedio de 4,3 veces a una media de 1,4 veces el límite superior normal (p=0,01). Exceptuando un paciente con elevación importante de creatin-quinasa y otro que se quejó de sensación de acidez, la tolerancia reportada fue muy buena. Es concluyente que la telbivudina indujo supresión de la carga viral en forma potente y temprana tanto en pacientes con HCB antígeno e positivo como antígeno e negativo, mejoró los valores de ALT y fue bien tolerada la dosis por la mayoría. La reducción de la carga viral a niveles incluso indetectables durante el primer año de tratamiento, debería contribuir a prevenir la emergencia temprana de cepas del VHB resistentes a esta droga antiviral.
According to international scientific consensus, the fundamental goal in the treatment of chronic hepatitis B (CHB) is currently to achieve suppression of the viral replication in a very potent way at the shortest possible time. It follows our clinical experience accomplished in Venezuela by using the nucleoside analog telbivudine in patients with CHB. We studied twenty-nine carriers with CHB, mean age of 44±17 years old, male/female ratio 2/1, 23 of them with e antigen positive CHB and the remaining 6 with e antigen negative CHB. We selected the viral load (HBV DNA), the ALT value and the treatment tolerance as the parameters to be assessed. During an average treatment period of 7,3 months each patient received 600 mg daily of telbivudine. 86.2% of them showed significant decreased of the circulating HBV DNA load, from 7.3±1.2 log10 copies/mL to 1.9±1.0 log10 copies/mL (p= 0.0001). In addition, a significant decrease of ALT values from a mean of 4.3 fold to 1.4 fold (p=0.01) was also demonstrated. The group of patients showed very good tolerance of the doses, except one who presented increased creatine kinase value and another one who complained from peptic symptoms. It is conclusive that Telbivudine induced early and potent viral suppression, either in e antigen positive or e antigen negative CHB, improved the ALT values and was very well-tolerated by the majority. The viral load reduction, even undetectable during the first year of treatment, should contribute to prevent the early emergency of resistant strains to this antiviral drug.
RESUMO
Introducción: la gran demanda de un método confiable, reproducible, específico y altamente sensible para la cuantificación de ácidos nucleicos (ADN/ ARN), marcó el desarrollo de los ensayos de Reacción en Cadena de la Polimerasa cuantitativa (RCPc) en tiempo real. Objetivo: descripción y análisis de la RCPc en tiempo real para la definición y el manejo actual de los pacientes con hepatitis crónica B (HCB). Material y Método: fueron investigadas cuarenta muestras de suero provenientes de portadores conocidos del VHB empleando RCPc tiempo real mediante el sistema Rotor-Gene 3000 (Corbett Research, Sydney, Australia). Resultados: el sistema utilizado para RCPc tiempo real detecta secuencias de ADN VHB en un amplio rango que puede ser expresado tanto en copias/ml como en UI/ml. Su aplicación permite la clasificación final de los diferentes portadores del VHB, ilustrándose su utilidad en el seguimiento secuencial de aquellos pacientes con HCB en tratamiento. Conclusión: la detección y la medición de secuencias de ADN VHB, en muestras clínicas de suero mediante RCPc en tiempo real, aporta mayor sensibilidad y precisión para definir la historia natural y el estado de replicación viral de los portadores crónicos del VHB antes, durante y posterior al tratamiento.
Introduction: The great need of a reliable, reproducible, specific and highly sensitive method to detect nucleic acids (DNA/RNA), induced the development of real-time quantitative assays based on polymerase chain reaction (real time PCRq). Objective: Description and analysis of a real time PCRq assay for the definition and management of patients with chronic hepatitis B (CHB). Material and Method: Forty serum samples from known HBV carriers were investigated employing real-time PCRq by means of a Rotor-Gene 3000 system (Corbett Research,Sydney,Australia). Results: the system for realtime PCRq detects a wide range of HBV DNA sequences which could be expressed either in copies/mL or in IU/mL .Its application allows the final classification of different HBV carrier status. An illustration of its usefulness in the sequential follow-up of patients on treatment for CHB is made. Conclusion: the detection and measure of HBV DNA sequences in clinical serum samples through real-time PCRq is more sensitive and exact to define the natural history and the status of viral replication in HBV chronic carriers before, during and after treatment.