RESUMO

Este trabalho teve como objetivo desenvolver duas PCR multiplex (PCRm) para a detecção dos genes das enterotoxinas estafilocócicas (EE) A (sea), B (seb), C (sec) e D (sed) em Staphylococcus aureus isolados de alimentos de origem animal, bem como relacionar a presença desses genes com a origem do microrganismo. As duas PCRm foram padronizadas utilizando-se cepas de S. aureus cuja capacidade toxigênica foi previamente confirmada através de ELISA indireto, com o uso de toxinas e soros antitoxinas de referência. Em seis (12%) dos 50 isolados de S. aureus foi possível detectar um ou mais genes de EE, sendo que um isolado albergava os genes sea e seb, três isolados albergavam seb e dois albergavam sed. As duas PCRm desenvolvidas são eficientes para a detecção dos genes sea, seb, sec e sed e, considerando-se a associação existente entre S. aureus enterotoxigênicos portadores dos genes sea e seb e humanos, e genes sec e sed com outros animais, a origem mais provável da maioria dos isolados foram os manipuladores de alimentos.

The object of this work was to develop two multiplex PCR (mPCR) for the detection of genes of staphylococcal enterotoxins (EE) A (sea), B (seb), C (sec) and D (sed) of Staphylococcus aureus isolated from food of animal origin and to relate the presence of the genes with the origin of the microorganism. The two mPCR were standardized using strains of S. aureus whose toxigenic capacity was previously confirmed through indirect ELISA, with the use of reference toxins and serum antitoxins. In six (12%) out of 50 isolates of S. aureus it was possible to detect one or more genes of EE; one isolate harbored sea and seb genes, three isolates harbored seb and two harbored sed. The two sets of mPCR developed are efficient for the detection of the sea, seb, sec and sed, and, considering the existing association of enterotoxigenic S. aureus genes sea and seb with human beings and genes sec and sed with other animals, the most likely origin of the majority of the isolates are the food handlers.

Este estudio tuvo como objetivo desarrollar dos PCR multiplex (mPCR) para la detección de los genes de enterotoxinas estafilococicas (EE) A (sea), B (seb), C (sec) y D (sed) en Staphylococcus aureus aislados de alimentos de origen animal, y relacionar la presencia de los genes con el origen del microorganismo. Las mPCR fueron estandarizadas utilizando cepas toxigénicas de S. aureus, cuya capacidad fue previamente confirmada por ELISA indirecto, con la utilización de toxinas y sueros de referencia. En seis (12%) de los 50 S. aureus aislados fue posible detectar uno o mas genes de EE, siendo que un aislado albergaba sea y seb, tres aislados albergavam seb y dos albergavam sed. Los dos conjuntos de mPCR desarrollados son eficaces en la detección de los genes sea, seb, sec y sed, y, teniendo en cuenta la asociación entre S. aureus enterotoxigénicos con genes sea y seb y humanos, y los genes sec y sed con otros animales, el origen más probable de la mayoría de los aislados son los manipuladores de alimentos.

RESUMO

The immunomagnetic separation (IMS) is a technique that has been used to increase sensitivity and specificity and to decrease the time required for detection of Salmonella in foods through different methodologies. In this work we report on the development of a method for detection of Salmonella in chicken cuts using in house antibody-sensitized microspheres associated to conventional plating in selective agar (IMS-plating). First, protein A-coated microspheres were sensitized with polyclonal antibodies against lipopolysacharide and flagella from salmonellae and used to standardize a procedure for capturing Salmonella Enteritidis from pure cultures and detection in selective agar. Subsequently, samples of chicken meat experimentally contaminated with S. Enteritidis were analyzed immediately after contamination and after 24h of refrigeration using three enrichment protocols. The detection limit of the IMS-plating procedure after standardization with pure culture was about 2x10 CFU/mL. The protocol using non-selective enrichment for 6-8h, selective enrichment for 16-18h and a post-enrichment for 4h gave the best results of S. Enteritidis detection by IMS-plating in experimentally contaminated meat. IMS-plating using this protocol was compared to the standard culture method for salmonellae detection in naturally contaminated chicken cuts and yielded 100% sensitivity and 94% specificity. The method developed using in house prepared magnetic microespheres for IMS and plating in selective agar was able to diminish by at least one day the time required for detection of Salmonella in chicken products by the conventional culture method.

A separação imunomagnética (IMS) é uma técnica que tem sido associada a diferentes métodos de detecção de Salmonella em alimentos para aumentar a sensibilidade e a especificidade e diminuir o tempo de análise. Neste trabalho é comunicada a obtenção de microesferas magnéticas sensibilizadas com anticorpos anti-Salmonella e seu uso em associação com a metodologia de cultivo convencional para desenvolver um método de detecção de salmonelas em cortes de frango (IMS-plaqueamento). Inicialmente, microesferas cobertas com proteína A foram sensibilizadas com anticorpos policlonais contra lipopolissacarídeo e flagelo de salmonelas e usadas na padronização de um procedimento que captura Salmonella Enteritidis em cultivo puro e faz posterior detecção em ágar seletivo. A seguir, amostras de carne de frango experimentalmente contaminadas com S. Enteritidis foram analisadas imediatamente após a contaminação e após 24h de refrigeração utilizando três protocolos de enriquecimento. O limite de detecção foi cerca de 2x10 UFC/mL. O protocolo que incluiu enriquecimento não-seletivo por 6-8h, enriquecimento seletivo por 16-18h e pós-enriquecimento por 4h foi o que proporcionou melhor resultado na detecção de S. Enteritidis em carne de frango experimentalmente contaminada. Este protocolo foi comparado à metodologia convencional em estudo de detecção de salmonelas em cortes de frango naturalmente contaminados e obteve 100% de sensibilidade e 94% de especificidade. O método desenvolvido foi capaz de diminuir em pelo menos um dia o tempo de detecção de salmonelas em cortes de frango pela metodologia convencional.

RESUMO

Salmonella Enteritidis is the main cause of salmonellosis. The use of antimicrobials to prevent and to treat this infection, as well their use like growth promoters, has induced the emergency of resistants trains. The aim of this work was to search the presence of Salmonella in poultry products and to investigate the isolates resistance to antimicrobial agents. One hundred and twenty samples of poultry products were analyzed, according to the Food and Drug Administration. Salmonella was isolated from seven (15.83%) samples and four serotypes were identified, Enteritidis, Newport, Derby and Agona. Enteritidis was the most prevalent serotype (71.4%). Thirty-six (94.7%), 34 (89.5%), 32 (84.2%) and 32 (84.2%) isolates were susceptible to chloramphenicol, norfloxacin, ciprofloxacin and ampicillin, respectively. Thirty-three (86.8%) isolates were resistant to nalidixic acid. All isolates (100%) were susceptible to ceftriaxone. Twenty-five isolates (65.8%) were resistant to tetracycline. Five isolates (13.2%) multiresistant were found. The inspection of poultry products must be more rigorous, regarding to the possible presence of Salmonella. The occurrence of Salmonella strains resistant to antimicrobial agents is indicative of more control necessity in use of these drugs.

Salmonella Enteritidis tem sido o principal sorotipo causador de salmonelose. O uso de antimicrobianos na prevenção e no tratamento dessa infecção, assim como a utilização destes como promotores de crescimento, tem provocado o aparecimento de cepas resistentes. O trabalho teve por objetivo investigar a presença de Salmonella em produtos de frango e verificar a resistência dos isolados frente a agentes antimicrobianos. Foram analisadas 120 amostras de produtos de frango, segundo metodologia preconizada pela Food and Drug Administration. Salmonella foi isolada de sete (15,83%) amostras e foram identificados quatro sorotipos, Enteritidis, Newport, Derby e Agona. Enteritidis foi o sorotipo de maior prevalência (71,4%). Trinta e seis (94,7%), 34 (89,5%), 32 (84,2%) e 32 (84,2%) isolados foram sensíveis aos antimicrobianos cloranfenicol, norfloxacina, ciprofloxacina e ampicilina, respectivamente. Trinta e três (86,8%) isolados foram resistentes ao ácido nalidíxico. Todos os isolados (100%) foram sensíveis à ceftriaxona. Vinte e cinco isolados (65,8%) foram resistentes à tetraciclina. Foram encontrados cinco (13,2%) isolados multirresistentes. A fiscalização dos produtos de frango deve ser mais rigorosa, quanto a possível presença de Salmonella. O aparecimento de cepas de Salmonella resistentes a agentes antimicrobianos é indicativo da necessidade de maior controle no uso desses fárma

RESUMO

The enforcement of legislation that regulates the presence of genetically modified organisms (GMOs) in food and food ingredients is totally dependent on the sensitivity and reliability of the GMO testing methods. In this review, the most relevant methods such as recombinant proteins or DNA-based methods were discussed, emphasizing their main properties, limitations and advantages. The regulamentation and some suggestions of alternative methods for the detection of GMOs were also discussed.

O cumprimento da legislação que regulamenta a comercialização de alimentos e ingredientes contendo Organismos Geneticamente Modificados (OGMs) é totalmente dependente da sensibilidade e confiabilidade dos métodos de detecção e quantificação de OGMs. Na presente revisão, foram discutidos os métodos mais relevantes para tais fins, especialmente aqueles que se baseiam na detecção da proteína ou do DNA recombinante, destacando as suas principais propriedades, limitações e vantagens. A regulamentação e algumas sugestões de métodos alternativos para a detecção de OGMs também são abordadas.

RESUMO

The enforcement of legislation that regulates the presence of genetically modified organisms (GMOs) in food and food ingredients is totally dependent on the sensitivity and reliability of the GMO testing methods. In this review, the most relevant methods such as recombinant proteins or DNA-based methods were discussed, emphasizing their main properties, limitations and advantages. The regulamentation and some suggestions of alternative methods for the detection of GMOs were also discussed.

O cumprimento da legislação que regulamenta a comercialização de alimentos e ingredientes contendo Organismos Geneticamente Modificados (OGMs) é totalmente dependente da sensibilidade e confiabilidade dos métodos de detecção e quantificação de OGMs. Na presente revisão, foram discutidos os métodos mais relevantes para tais fins, especialmente aqueles que se baseiam na detecção da proteína ou do DNA recombinante, destacando as suas principais propriedades, limitações e vantagens. A regulamentação e algumas sugestões de métodos alternativos para a detecção de OGMs também são abordadas.

RESUMO

An outbreak of foodbome intoxication in an institutional restaurant was investigated. Fifty-six people, out of 88, had vomiting, diarrhea, abdominal pain, prostration, fever and headache after eating a meal that included chicken sandwich, orange drink and milk pudding. Symptoms appeared between one and a halfhour and 12 hours after eating the meal and lasted from 24 to 36 hours. Specifíc attack rates were 64% for chicken sandwich, 61% for orange drink and 60% for milk pudding. Enterotoxin A secreting Staphylococcus aureus count in chicken Sandwich was 2 X 10(8)CFU.g-1. Results of the questionnaire appleied to patrons, and results of bacteriological analysis of food items, provided circunstantial evidence to conclude that an outbreak of foodbome intoxication caused by the chicken sandwich contaminated with Staphylococcus aureus enterotoxin A has ocurred.

Foi investigado um surto de intoxicação alimentar ocorrido em um restaurante institucional. Cinqüenta e seis pessoas, de um total de 88, foram acometidas de vômitos, diarréia, dores abdominais, prostração, febre e cefaléia após ingerirem uma refeição composta de sanduíche de galinha, refresco de laranja e pudim de leite. Os sintomas apareceram entre uma hora e meia e 12 horas após a ingestão da refeição e duraram 24 a 36 horas. As taxas de ataque específico foram de 64% para o sanduíche de galinha, de 61% para o refresco de laranja e de 60% para o pudim. A contagem de Staphylococcus aureus secretores de enterotoxina A no sanduíche de galinha foi de 2 X 10(8)UFC.g-1. Estes resultados, juntamente com os obtidos nos questionários aplicados às pessoas que ficaram doentes, forneceram provas circunstanciais que permitiram concluir que ocorreu uma intoxicação alimentar provocada pelo sanduíche de galinha contaminado com enterotoxina A de Staphylococcus aureus.

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An outbreak of foodbome intoxication in an institutional restaurant was investigated. Fifty-six people, out of 88, had vomiting, diarrhea, abdominal pain, prostration, fever and headache after eating a meal that included chicken sandwich, orange drink and milk pudding. Symptoms appeared between one and a halfhour and 12 hours after eating the meal and lasted from 24 to 36 hours. Specifíc attack rates were 64% for chicken sandwich, 61% for orange drink and 60% for milk pudding. Enterotoxin A secreting Staphylococcus aureus count in chicken Sandwich was 2 X 10(8)CFU.g-1. Results of the questionnaire appleied to patrons, and results of bacteriological analysis of food items, provided circunstantial evidence to conclude that an outbreak of foodbome intoxication caused by the chicken sandwich contaminated with Staphylococcus aureus enterotoxin A has ocurred.

Foi investigado um surto de intoxicação alimentar ocorrido em um restaurante institucional. Cinqüenta e seis pessoas, de um total de 88, foram acometidas de vômitos, diarréia, dores abdominais, prostração, febre e cefaléia após ingerirem uma refeição composta de sanduíche de galinha, refresco de laranja e pudim de leite. Os sintomas apareceram entre uma hora e meia e 12 horas após a ingestão da refeição e duraram 24 a 36 horas. As taxas de ataque específico foram de 64% para o sanduíche de galinha, de 61% para o refresco de laranja e de 60% para o pudim. A contagem de Staphylococcus aureus secretores de enterotoxina A no sanduíche de galinha foi de 2 X 10(8)UFC.g-1. Estes resultados, juntamente com os obtidos nos questionários aplicados às pessoas que ficaram doentes, forneceram provas circunstanciais que permitiram concluir que ocorreu uma intoxicação alimentar provocada pelo sanduíche de galinha contaminado com enterotoxina A de Staphylococcus aureus.