RESUMO
A clonagem por transferência nuclear de células somáticas consiste em uma atraente ferramenta para a conservação e multiplicação de espécies. A eficiência desta biotécnica depende da obtenção e seleção de células doadoras de núcleo derivadas da pele de indivíduos de interesse. Em alguns mamíferos encontrados em regiões de difícil acesso ou distantes de laboratórios especializados, o armazenamento a 4°C de tecidos somáticos da pele seria uma alternativa para a conservação do material genético desses animais. Contudo, o emprego desta técnica depende de alguns fatores, como os períodos e as condições de armazenamento a 4°C das amostras, os quais podem influenciar na recuperação das células após cultivo in vitro dos tecidos. Em mamíferos domésticos, estudos têm mostrado variações quanto ao período de estocagem e a presença de meio nutritivo. Já em mamíferos silvestres, apenas são relatados o uso da refrigeração como ferramenta de transporte em curto prazo. Assim, o objetivo desta revisão é apresentar as diferentes condições de armazenamento a 4°C de tecidos somáticos, evidenciando a importância dessa técnica para a conservação da biodiversidade.(AU)
Cloning by somatic cell nuclear transfer is an attractive tool for conservation and multiplication of species. The efficiency of this biotechnique depends on the obtaining and selection of nucleus donor cells derived from the skin of individuals of interest. In some mammals found in regions difficult to access or distant from specialized laboratories, the storage at 4°C of somatic tissues of the skin would be an alternative for the conservation of the genetic material of these animals. Nevertheless, the use of this technique depends on some factors, such as periods and storage conditions at 4°C of the samples, which may influence the recovery of the cells after tissue culture in vitro. In domestic mammals, studies have shown variations regarding the period of storage and the presence of nutrient medium. Already, in wild mammals, only is related the use of refrigeration as transportation tool in the short term. Thus, the aim of this review is to present the different conditions of storage at 4°C of somatic tissues, evidencing the importance of this technique for the conservation of biodiversity.(AU)
Assuntos
Animais , Células-Tronco Adultas/citologia , Armazenamento de Produtos , Refrigeração , Boas Práticas de Distribuição , Controle de Qualidade , Clonagem de Organismos/veterinária , Técnicas In Vitro , Mamíferos , PeleRESUMO
A clonagem por transferência nuclear de células somáticas consiste em uma atraente ferramenta para a conservação e multiplicação de espécies. A eficiência desta biotécnica depende da obtenção e seleção de células doadoras de núcleo derivadas da pele de indivíduos de interesse. Em alguns mamíferos encontrados em regiões de difícil acesso ou distantes de laboratórios especializados, o armazenamento a 4°C de tecidos somáticos da pele seria uma alternativa para a conservação do material genético desses animais. Contudo, o emprego desta técnica depende de alguns fatores, como os períodos e as condições de armazenamento a 4°C das amostras, os quais podem influenciar na recuperação das células após cultivo in vitro dos tecidos. Em mamíferos domésticos, estudos têm mostrado variações quanto ao período de estocagem e a presença de meio nutritivo. Já em mamíferos silvestres, apenas são relatados o uso da refrigeração como ferramenta de transporte em curto prazo. Assim, o objetivo desta revisão é apresentar as diferentes condições de armazenamento a 4°C de tecidos somáticos, evidenciando a importância dessa técnica para a conservação da biodiversidade.
Cloning by somatic cell nuclear transfer is an attractive tool for conservation and multiplication of species. The efficiency of this biotechnique depends on the obtaining and selection of nucleus donor cells derived from the skin of individuals of interest. In some mammals found in regions difficult to access or distant from specialized laboratories, the storage at 4°C of somatic tissues of the skin would be an alternative for the conservation of the genetic material of these animals. Nevertheless, the use of this technique depends on some factors, such as periods and storage conditions at 4°C of the samples, which may influence the recovery of the cells after tissue culture in vitro. In domestic mammals, studies have shown variations regarding the period of storage and the presence of nutrient medium. Already, in wild mammals, only is related the use of refrigeration as transportation tool in the short term. Thus, the aim of this review is to present the different conditions of storage at 4°C of somatic tissues, evidencing the importance of this technique for the conservation of biodiversity.
Assuntos
Animais , Armazenamento de Produtos , Boas Práticas de Distribuição , Controle de Qualidade , Células-Tronco Adultas/citologia , Refrigeração , Clonagem de Organismos/veterinária , Mamíferos , Pele , Técnicas In VitroRESUMO
In vitro embryo production (IVEP) contributes to the quantitative and qualitative aspects of animal reproduction. Nevertheless, inherent technical factors such as oxidative stress can negatively influence the result and this can impair cell metabolism, thus decreasing the rates of in vitro development, and necessitating the supplementation of culture medium with antioxidants. In this context, compounds of natural origin with this property have been highlighted because of the positive results obtained at different stages of IVEP. Thus, this review aims to present the results obtained by using natural antioxidants to minimize the effects of oxidative stress on gametes and embryos. A variety of natural isolated substances and mixtures (essential oils and extracts) have been studied for supplementation of IVEP media, at stages of in vitro maturation, sperm capacitation, in vitro fertilization, and in vitro development of embryos in different mammalian species. Generally, beneficial effects are observed according to the concentration used, thus demonstrating the potential of several natural antioxidants. Therefore, the main challenges in using these compounds as antioxidants during IVEP include proving their efficiency against free radicals and determining the best concentration at each stage. In addition, understanding the mechanisms of action of such antioxidants is crucial...
A produção in vitro de embriões (PIVE) contribui para os aspectos quantitativos e qualitativos da reprodução animal. Contudo, fatores inerentes da técnica, como o estresse oxidativo, podem influenciar negativamente o resultado e isso pode prejudicar o metabolismo celular, diminuindo assim as taxas de desenvolvimento in vitro, e exigindo a suplementação do meio de cultivo com antioxidantes. Neste contexto, os compostos de origem natural com essa propriedade têm se destacado devido aos resultados positivos obtidos em diferentes estágios da PIVE. Assim, esta revisão pretende apresentar os resultados obtidos usando antioxidantes naturais para minimizar os efeitos do estresse oxidativo em gametas e embriões. Uma variedade de substâncias isoladas e de misturas naturais (óleos essenciais e extratos) tem sido estudada para a suplementação de meios de PIVE, nas etapas de maturação in vitro, capacitação espermática, fecundação in vitro e desenvolvimento in vitro de embriões em diferentes espécies de mamíferos. Geralmente, os efeitos benéficos são observados de acordo com a concentração utilizada, demostrando assim o potencial positivo de vários antioxidantes naturais. Portanto, os principais desafios para o uso desses compostos como antioxidantes durante a PIVE incluem provar sua eficiência contra os radicais livres e determinar a melhor concentração em cada etapa. Além disso...
Assuntos
Animais , Capacitação Espermática , Embrião de Mamíferos , Estresse Oxidativo , Fertilização in vitro/veterinária , Técnicas de Maturação in Vitro de Oócitos/veterinária , Técnicas de Cultura/veterináriaRESUMO
In vitro embryo production (IVEP) contributes to the quantitative and qualitative aspects of animal reproduction. Nevertheless, inherent technical factors such as oxidative stress can negatively influence the result and this can impair cell metabolism, thus decreasing the rates of in vitro development, and necessitating the supplementation of culture medium with antioxidants. In this context, compounds of natural origin with this property have been highlighted because of the positive results obtained at different stages of IVEP. Thus, this review aims to present the results obtained by using natural antioxidants to minimize the effects of oxidative stress on gametes and embryos. A variety of natural isolated substances and mixtures (essential oils and extracts) have been studied for supplementation of IVEP media, at stages of in vitro maturation, sperm capacitation, in vitro fertilization, and in vitro development of embryos in different mammalian species. Generally, beneficial effects are observed according to the concentration used, thus demonstrating the potential of several natural antioxidants. Therefore, the main challenges in using these compounds as antioxidants during IVEP include proving their efficiency against free radicals and determining the best concentration at each stage. In addition, understanding the mechanisms of action of such antioxidants is crucial...(AU)
A produção in vitro de embriões (PIVE) contribui para os aspectos quantitativos e qualitativos da reprodução animal. Contudo, fatores inerentes da técnica, como o estresse oxidativo, podem influenciar negativamente o resultado e isso pode prejudicar o metabolismo celular, diminuindo assim as taxas de desenvolvimento in vitro, e exigindo a suplementação do meio de cultivo com antioxidantes. Neste contexto, os compostos de origem natural com essa propriedade têm se destacado devido aos resultados positivos obtidos em diferentes estágios da PIVE. Assim, esta revisão pretende apresentar os resultados obtidos usando antioxidantes naturais para minimizar os efeitos do estresse oxidativo em gametas e embriões. Uma variedade de substâncias isoladas e de misturas naturais (óleos essenciais e extratos) tem sido estudada para a suplementação de meios de PIVE, nas etapas de maturação in vitro, capacitação espermática, fecundação in vitro e desenvolvimento in vitro de embriões em diferentes espécies de mamíferos. Geralmente, os efeitos benéficos são observados de acordo com a concentração utilizada, demostrando assim o potencial positivo de vários antioxidantes naturais. Portanto, os principais desafios para o uso desses compostos como antioxidantes durante a PIVE incluem provar sua eficiência contra os radicais livres e determinar a melhor concentração em cada etapa. Além disso...(AU)
Assuntos
Animais , Estresse Oxidativo , Embrião de Mamíferos , Técnicas de Maturação in Vitro de Oócitos/veterinária , Fertilização in vitro/veterinária , Capacitação Espermática , Técnicas de Cultura/veterináriaRESUMO
In vitro embryo production (IVEP) contributes to the quantitative and qualitative aspects of animal reproduction. Nevertheless, inherent technical factors such as oxidative stress can negatively influence the result and this can impair cell metabolism, thus decreasing the rates of in vitro development, and necessitating the supplementation of culture medium with antioxidants. In this context, compounds of natural origin with this property have been highlighted because of the positive results obtained at different stages of IVEP. Thus, this review aims to present the results obtained by using natural antioxidants to minimize the effects of oxidative stress on gametes and embryos. A variety of natural isolated substances and mixtures (essential oils and extracts) have been studied for supplementation of IVEP media, at stages of in vitro maturation, sperm capacitation, in vitro fertilization, and in vitro development of embryos in different mammalian species. Generally, beneficial effects are observed according to the concentration used, thus demonstrating the potential of several natural antioxidants. Therefore, the main challenges in using these compounds as antioxidants during IVEP include proving their efficiency against free radicals and determining the best concentration at each stage. In addition, understanding the mechanisms of action of such antioxidants is crucial to est
A produção in vitro de embriões (PIVE) contribui para os aspectos quantitativos e qualitativos da reprodução animal. Contudo, fatores inerentes da técnica, como o estresse oxidativo, podem influenciar negativamente o resultado e isso pode prejudicar o metabolismo celular, diminuindo assim as taxas de desenvolvimento in vitro, e exigindo a suplementação do meio de cultivo com antioxidantes. Neste contexto, os compostos de origem natural com essa propriedade têm se destacado devido aos resultados positivos obtidos em diferentes estágios da PIVE. Assim, esta revisão pretende apresentar os resultados obtidos usando antioxidantes naturais para minimizar os efeitos do estresse oxidativo em gametas e embriões. Uma variedade de substâncias isoladas e de misturas naturais (óleos essenciais e extratos) tem sido estudada para a suplementação de meios de PIVE, nas etapas de maturação in vitro, capacitação espermática, fecundação in vitro e desenvolvimento in vitro de embriões em diferentes espécies de mamÃferos. Geralmente, os efeitos benéficos são observados de acordo com a concentração utilizada, demostrando assim o potencial positivo de vários antioxidantes naturais. Portanto, os principais desafios para o uso desses compostos como antioxidantes durante a PIVE incluem provar sua eficiência contra os radicais livres e determinar a melhor concentração em
RESUMO
The somatic tissue cryopreservation of collared peccaries is an interesting alternative as conservationstrategies for maintaining the ecosystem and the optimization of breeding management. Therefore, the aim of thestudy was to evaluate different cryoprotectants in the vitrification solid surface of somatic tissue in collaredpeccaries. Thun, the tissue fragments were vitrified by solid surface in minimum essential medium modified byDulbecco supplemented with 10% bovine fetal serum (FCS) and different intracellular cryoprotectants [3.0 Mdimethylsulfoxide with 0.25 M sucrose (DMSO-SUC) and 3.0 M ethylene glycol with 0.25 M sucrose (EG-SUC)].Thus, the combination of 3.0 M EG, 0.25 M sucrose and 10% FCS was adequate to maintain normal tissuecharacteristics compared with non-vitrified fragments and vitrified with DMSO-SAC, especially for the volumetricratio of epidermis (34.5 vs. 36.6 vs. 32.1) and dermis (61.2 vs. 58.7 vs. 62.5), respectively.(AU)
Assuntos
Animais , Artiodáctilos/embriologia , Vitrificação , Crioprotetores/administração & dosagem , Crioprotetores/análiseRESUMO
The aim was to evaluate the quantity and quality of immature oocytes obtained from bovine ovarieswith high and low antral follicle count (AFC). Therefore, ovaries were obtained from a slaughterhouse and thelaboratory were divided in two groups: high count (HC: ≥ 20) and low count (LC: 0.05). Therefore, it is concluded that the AFC does not influence thequantity and quality of oocytes.
Assuntos
Feminino , Animais , Bovinos , Bovinos/fisiologia , Oócitos/classificação , Técnicas de Cultura EmbrionáriaRESUMO
The somatic tissue cryopreservation of collared peccaries is an interesting alternative as conservationstrategies for maintaining the ecosystem and the optimization of breeding management. Therefore, the aim of thestudy was to evaluate different cryoprotectants in the vitrification solid surface of somatic tissue in collaredpeccaries. Thun, the tissue fragments were vitrified by solid surface in minimum essential medium modified byDulbecco supplemented with 10% bovine fetal serum (FCS) and different intracellular cryoprotectants [3.0 Mdimethylsulfoxide with 0.25 M sucrose (DMSO-SUC) and 3.0 M ethylene glycol with 0.25 M sucrose (EG-SUC)].Thus, the combination of 3.0 M EG, 0.25 M sucrose and 10% FCS was adequate to maintain normal tissuecharacteristics compared with non-vitrified fragments and vitrified with DMSO-SAC, especially for the volumetricratio of epidermis (34.5 vs. 36.6 vs. 32.1) and dermis (61.2 vs. 58.7 vs. 62.5), respectively.
Assuntos
Animais , Artiodáctilos/embriologia , Crioprotetores/administração & dosagem , Crioprotetores/análise , VitrificaçãoRESUMO
The aim was to evaluate the quantity and quality of immature oocytes obtained from bovine ovarieswith high and low antral follicle count (AFC). Therefore, ovaries were obtained from a slaughterhouse and thelaboratory were divided in two groups: high count (HC: ≥ 20) and low count (LC: <20) follicles. After thefollicular aspiration, retrieved oocytes were assessed by morphological appearance and brilliant cresyl blue test(BCB) in viable and non-viable. The data were analyzed by Fischer exact test (P < 0.05). After three replicates,85 ovaries were recovered and distributed between the groups HC (22) and LC (63). There was no significantdifference in the recovery rate. Furthermore, in the morphology and BCB test the viability rates werestatistically similar between groups (P > 0.05). Therefore, it is concluded that the AFC does not influence thequantity and quality of oocytes.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Bovinos , Bovinos/fisiologia , Oócitos/classificação , Técnicas de Cultura EmbrionáriaRESUMO
O sucesso das biotecnologias reprodutivas assistidas, especialmente a clonagem por transferência nuclear de células somáticas, envolve múltiplos fatores e cada um destes pode influenciar a eficiência final. Em geral, os protocolos de isolamento, caracterização e criopreservação de células das espécies a serem clonadas constituem a etapa inicial para a obtenção de descendência clone viável, além de contribuir para outros estudos relacionados à biotecnologia celular. Neste contexto, o sucesso desta etapa pode ser alcançado pela associação da escolha do tipo celular, estabelecimento de altas taxas de viabilidade, atividade proliferativa e metabólica após o cultivo in vitro e criopreservação, além da sincronia do ciclo celular antes da reconstrução do embrião clone. Os fibroblastos e outras células derivadas da pele oriundas da região auricular de fetos ou animais adultos representam a fonte de fácil manipulação e mais adequada para a obtenção de carioplastos. Adicionalmente, avanços nesta área têm mostrado a possibilidade da produção de células pluripotentes a partir de células somáticas modificadas. Assim, o objetivo deste manuscrito é realizar uma revisão sobre os aspectos práticos da obtenção e estabelecimento de células doadoras de núcleo derivadas da pele para a reconstrução embrionária, descrevendo os fatores relacionados em cada procedimento que interferem no resultado final.
The success of assisted reproductive biotechnology, especially cloning by somatic cell nuclear transfer, involves multiple factors and each of these may influence the final efficiency. Ingeneral, the protocols for the isolation, characterization and cryopreservation of cells of the species to be cloned consist in initial step for obtaining viable clone offspring, and contribute to other studies on cell biotechnology. In this context, the success of this step may be achieved by association of the choice of cell type, establishment of high rates of viability, metabolic and proliferative activities after in vitroculture and cryopreservation, and cell cycle synchronization prior to embryo reconstruction. Fibroblasts and other skin derived-cells from ear region of fetal or adult animals represent a source of easy handling and better appropriate for obtaining caryoplasts. Additionally, advances in this area are showing the possibility of induced pluripotent cells from modified somatic cells. Thus, the aim of this manuscript is to describe the practical aspects of obtaining and establishing skin-derived donor cells for embryo reconstruction, with emphasis to the factors listed in each procedure that affect the final outcome.