RESUMO
En este estudio, se examinó la efectividad del uso del polipéptido 3D recombinante, obtenido en su forma nativa en una prueba de IDGA (IDGA-3D), para uso en la detección de anticuerpos específicos de infección con VFA, independientemente de la condición de vacunación. Los resultados indican que en relación a la tradicional prueba de IDGA-VIAA, la IDGA 3D ofrece, particularmente cuando se evalúan sueros de bajo título, un método más consistente, con especificidad comparable, y por lo menos la misma sensibilidad. Ninguno de los antígenos ofreció una ventaja particular con respecto a la definición de las bandas de precipitación. El reemplazo del VIAA por la proteína 3D recombinante tiene considerables atracciones, dado que proporciona un suministro ilimitado de material inocuo, económico, de fácil purificación y consistente, eliminando la presencia potencial de antígenos no específicos de células BHK o componentes de la cápside del VFA.
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Febre Aftosa , RNA Polimerases Dirigidas por DNA , RNA Viral , Imunodifusão , Vírus da Febre AftosaRESUMO
La estomatitis vesicular es una enfermedad que afecta bovinos, ovinos, porcinos, caprinos y equinos clínicamente indistinguible de la fiebre aftosa. En Brasil fue diagnosticada por primera vez en 1964 en los estados de Alagoas y Pernambuco. En este trabajo se hace un relato histórico a partir de los resultados de diagnósticos de los virus tipos Indiana-2 e Indiana-3 realizados durante los años 1964-1996 en el Centro Panamericano de Fiebre Aftosa.
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Vírus da Estomatite Vesicular Indiana , Zoonoses , Estomatite VesicularRESUMO
Se describe um método práctico basado en el uso de un detergente no iónico, que se puede remover por diálisis para la extración de las glicoproteínas del virus de la estomatitis vesicular con el objeto de ser usadas para la identificación de anticuerpos por la técnica de ELISA.
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Vírus da Estomatite Vesicular Indiana , Glicoproteínas , Detergentes , Diálise , Anticorpos , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Cabras , Ovinos , Suínos , Cavalos , Estomatite VesicularRESUMO
Monoclonal antibodies (MAbs) were produced against foot-and-mouth disease (FMD) virus types O1 Campos Br1/58, A24 Cruzeiro Br1/55, and C3 Indaial Br1/71, which are the strains used for production of FMD vaccines in the majority of South American countries. Within the library of MAbs produced, a group was selected on the basis of their neutralizing titer in cell culture, protective titer in suckling mice, sensitivity to trypsin, and specificity for virus structural proteins. The MAbs were utilized in an ELISA test format to compare European and South American representative field isolates with vaccine production strains in their r1 relationship as obtained by 50% complement fixation (CF50) with polyclonal antibodies (PAb) and their virus neutralization (VN) relationship obtained with sera from one-time-vaccinated and from revaccinated cattle, respectively. The MAbs selected varied in their reactivity against the different strains and, therefore, enabled us to compare field FMDV strains to those against which the MAbs were produced, with definite advantages over the r1 and VN ratios. Thus, panels of MAb produced with the vaccine strains and appropriately selected are significantly useful for the FMD-control programs because they serve to provide guidance on the immunological coverage provided by the vaccines against FMDV strains circulating in the field. The MAbs are also useful for the differentiation of FMD virus strains.
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Anticorpos Monoclonais/imunologia , Aphthovirus/imunologia , Animais , Bovinos , Células Cultivadas , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/veterinária , Epitopos , Febre Aftosa/imunologia , Febre Aftosa/prevenção & controle , Camundongos , Camundongos Endogâmicos BALB C , Fenótipo , Vacinas Virais/imunologiaRESUMO
An indirect "sandwich" enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using polyvalent and monovalent antisera was compared with the 50% complement fixation (CF50) test for the detection of foot-and-mouth disease (FMD) O, A, and C virus types. ELISA was more sensitive than CF50 tests when polyvalent antisera were used for detecting the 3 types of virus in epithelial samples, whereas ELISA using monovalent antisera was the least sensitive technique. The ELISA performed with polyvalent antisera was 9 times more sensitive for detecting FMD virus than that with monovalent antisera. However, viral isolation in cell culture was the most sensitive detection system. The combined use of ELISA with polyvalent antisera and cell culture inoculations was the most effective procedure for identifying FMD virus in epithelial samples from the field.
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Aphthovirus/classificação , Doenças dos Bovinos/microbiologia , Febre Aftosa/microbiologia , Animais , Antígenos Virais/análise , Aphthovirus/imunologia , Aphthovirus/isolamento & purificação , Bovinos , Doenças dos Bovinos/diagnóstico , Linhagem Celular , Testes de Fixação de Complemento , Reações Cruzadas , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Febre Aftosa/diagnóstico , Soros Imunes/imunologia , Sensibilidade e EspecificidadeRESUMO
Los hallazgos del presente estudio demuestran que el hamster es más susceptible a la infección por el virus de la fiebre aftosa que el ratón lactante, habitualmente empleado para efectuar aislamientos de este agente con fines diagnósticos. El hamster mostró una susceptibilidad superior a la inoculación de Aphthovirus obtenidos de bovinos infectados naturalmente. La comparación se basó en las manifestaciones clínicas, el tiempo medio de supervivencia, el porcentaje de mortalidad, la relación entre título y mortalidad, y el comportamiento de la infección en animales destetados. Le siguieron en orden descendente de susceptibilidad los meriones, conejos y cobayos lactantes, mientras que las ratas resistieron a la infección. Los resultados se analizan en términos de su implicancia diagnóstica para estudios epidemiológicos y el control de la enfermedad.
The present findings demonstrate that the hamster is more susceptible to infection with foot-and-mouth disease virus than the sucking mouse, traditionally used for isolating this agent. Hamsters were more sensitive to the inoculation of Aphthovirus obtained from bovines with natural infections. The comparison was based on clinical manifestations, mean survival time, percent mortality, relationship between titer and mortality, and evolution of infection in weanlings. Following in decreasing order of sisceptibility were suckling gerbils, rabbits and guinea pigs, while rats were refractory. The results are discussed in terms of their diagnostic implications for epidemiologic studies and disease control.
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Febre Aftosa , Aphthovirus , Animais de Laboratório , Inoculações Seriadas , Estudos Epidemiológicos , Febre Aftosa , Animais de Laboratório , Inoculações Seriadas , Estudos EpidemiológicosRESUMO
Anticuerpos monoclonales fueron preparados contra herpesvirus bovino tipo 1 (BHV-1) purificado y se seleccionaron varios de acuerdo con su habilidad de neutralizar la infectividad viral. El virus fue purificado por dos métodos alternativos de concentración, con polietilenglicol seguido de ultracentrifugación sobre un colchón de sacarosa al 25 por ciento (p/p) o usando un gradiente linear de tartrato de potasio. De un total de 204 líneas celulares que segregaban anticuerpos para el virus, obtenidas en dos fusiones, se seleccionaron y expandieron clonalmente 39 hibridomas. La selección se basó en su reactividad específica por ELISA. De éstos, 11 anticuerpos monoclonales fueron capaces de neutralizar BHV-1 total o parcialmente, con o sin el agregado de complemento. Siete anticuerpos monoclonales fueron producidos (en la forma de fluido ascítico) y purificados por precipitación en sulfato de amonio. De éstos, dos fueron capaces de prevenir la penetración de virión luego de su adherencia a la células. Asimismo, tres anticuerpos monoclonales fueron seleccionados para ser usados en las pruebas de inmunoperoxidasa para la detección del BHV-1 en cultivos celulares infectados.
Monoclonal antibodies (McAbs) were prepared against purified Bovine Herpesvirus Type-(BHV-1) and selected for their ability to neutralize viral infectivity. Viral purification was performed by polyethylene glycol concentration and ultracentrifugation on a 25% (w/w) sucrose cushion, and by potassium tartrate linear gradient. Out of 204 cell lines expressing antobodies to the virus, obtained in two fusions, 39 hybridomas were selected and cloned based on enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) reactivity. Eleven McAbs were able to neutralize BHV-1 partially or totally, with or without complement. Seven McAbs were produced as ascitic fluid, and ammonium sulfate-purified. Of these, two were able to prevent virion penetration into the cell after attachment. Three neutralizing McAbs were selected for use in immunoperoxidase tests for detecting BHV-1 in infected cell cultures.
Assuntos
Anticorpos Monoclonais , Testes de Neutralização , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Ultracentrifugação , Técnicas Imunoenzimáticas , Anticorpos Monoclonais , Testes de Neutralização , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Técnicas ImunoenzimáticasRESUMO
An indirect sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) has been used for vesicular stomatitis virus (VSV) typing using sets of monovalent and polyvalent rabbit/guinea pig antisera for identification of VSV types New Jersey (VNJ) and Indiana (VIND). The VIND polyvalent antiserum (VIND-P) detects any strain of the 3 subtypes of the VIND type (VIND-1, VIND-2, and VIND-3) with the same strong reactivity. It is also possible to subtype the VIND strains using VIND-P rabbit antiserum as capture antibody and monovalent VIND-1, VIND-2, or VIND-3 guinea pig antisera as detector. The ELISA proposed has about 10 times more sensitivity and provides 10% more positive results than does the complement fixation 50% (CF50) test when epithelial samples are tested.
Assuntos
Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Estomatite/veterinária , Vírus da Estomatite Vesicular Indiana/isolamento & purificação , Vesiculovirus , Viroses/veterinária , Animais , Antígenos Virais/análise , Bovinos , Doenças dos Bovinos/diagnóstico , Doenças dos Bovinos/microbiologia , Testes de Fixação de Complemento , Diagnóstico Diferencial , Estudos de Avaliação como Assunto , Cobaias , Soros Imunes/imunologia , Valor Preditivo dos Testes , Coelhos , Sorotipagem , Estomatite/diagnóstico , Estomatite/microbiologia , Suínos , Doenças dos Suínos/diagnóstico , Doenças dos Suínos/microbiologia , Vírus da Estomatite Vesicular Indiana/classificação , Viroses/diagnóstico , Viroses/microbiologiaRESUMO
Se preparó un antígeno soluble del virus de la lengua azul (VLA) para ser utilizado en pruebas de inmunodifusión en gel de agar (IDGA). Dicho antígeno es grupo específico, y es capaz de detectar anticuerpos inducidos por cualquiera de los 24 serotipos del VLA. Fue producido a partir del VLA serotipo 4 y controlado en IDGA frente a antígeno y sueros de referencia (NVSL, Ames, EUA; LARA, Campinas, Brasil; Veterinary Diagnostic Technology, Inc., EUA) y por la técnica inmunoenzimática (ELISA) con anticuerpo monoclonal 3-17-A3 (IADR, Pirbright, Inglaterra). Todas las pruebas mostraron una reacción de total identidad con los reactivos controles.
A soluble antigen of the bluetongue virus (BTV) was prepared for use in immunodifusion in agar gel tests (IDAG). The antigen is group specific and is capable of detecting antibodies induced by any of the 24 BTV serotypes. It was produced from type 4 BTV serotype and controled in IDAG against reference antigens and sera (NVSL, Ames, USA; LARA, Campinas, Brazil; Veterinary Diagnostic Technology, Inc. USA) and by the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) with 3-17-A3 monoclonal antibody (IADR, Pirbright, England). All tests yielded a reaction of total identify with the control reagents.