RESUMO

O presente trabalho tem como objetivo testar a hipótese de que, à semelhança do que ocorre na uremia, cães com azotemia pré-renal sofrem estresse oxidativo, o qual está relacionado com alterações do metabolismo oxidativo e apoptose dos neutrófilos. Para tal, foi determinada a peroxidação lipídica pela quantificação do malondialdeído (MDA) e o status antioxidante total do plasma de 15 cães normais e 10 com azotemia pré-renal, correlacionando-os com a produção de superóxido e o índice apoptótico dos neutrófilos. As determinações do MDA e do status antioxidante total foram estabelecidas empregando-se um conjunto de reagentes comerciais. Por meio de citometria de fluxo capilar, a produção de superóxido e a apoptose de neutrófilos isolados de sangue periférico foram determinadas utilizando-se a sonda hidroetidina e o sistema anexina V-PE, respectivamente. Cães azotêmicos (26,29±5,32g/L) apresentaram menor concentração (p=0,0264) do antioxidante albumina em relação ao grupo-controle (30,36±3,29g/L) e também uma menor (p=0,0027) capacidade antioxidante total (2,36±0,32 versus 2,73±0,24mmol/L), enquanto não houve alteração da peroxidação lipídica plasmática e da produção de superóxido neutrofílica. Concluiu-se que, à semelhança do que ocorre na uremia, condições azotêmicas pré-renais no cão causam estresse oxidativo e aceleração da apoptose dos neutrófilos.

This study aims to test the hypothesis that, similarly to what occurs in uremia, dogs with prerenal azotemia suffer oxidative stress associated with changes in oxidative metabolism and apoptosis in neutrophils. For this purpose, fifteen normal dogs and ten with prerenal azotemia had lipid peroxidation determined by quantifying the malondialdehyde (MDA) and had plasma total antioxidant status evaluated, correlating them with the superoxide production and apoptotic index of neutrophils. MDA and plasma total antioxidant status were determined using commercial reagents. Using capillary flow cytometry, superoxide production and apoptosis were determined from isolated neutrophils of peripheral blood using the hydrithidine and Annexin V-PE probe system, respectively. Azotemic dogs (26.29±5.32g/L) had a lower concentration (p=0.0264) of the plasma antioxidant albumin than the control group (30.36±3.29g/L) and also had lower (p=0.0027) total antioxidant status (2.36±0.32 versus 2.73±0.24mmol/L), while no alterations were observed in plasma lipid peroxidation and superoxide production. It was concluded that, similarly to what occurs in uremia, prerenal azotemia causes oxidative stress and acceleration of neutrophil apoptosis in dogs.

Assuntos

RESUMO

O presente trabalho tem como objetivo testar a hipótese de que, à semelhança do que ocorre na uremia, cães com azotemia pré-renal sofrem estresse oxidativo, o qual está relacionado com alterações do metabolismo oxidativo e apoptose dos neutrófilos. Para tal, foi determinada a peroxidação lipídica pela quantificação do malondialdeído (MDA) e o status antioxidante total do plasma de 15 cães normais e 10 com azotemia pré-renal, correlacionando-os com a produção de superóxido e o índice apoptótico dos neutrófilos. As determinações do MDA e do status antioxidante total foram estabelecidas empregando-se um conjunto de reagentes comerciais. Por meio de citometria de fluxo capilar, a produção de superóxido e a apoptose de neutrófilos isolados de sangue periférico foram determinadas utilizando-se a sonda hidroetidina e o sistema anexina V-PE, respectivamente. Cães azotêmicos (26,29±5,32g/L) apresentaram menor concentração (p=0,0264) do antioxidante albumina em relação ao grupo-controle (30,36±3,29g/L) e também uma menor (p=0,0027) capacidade antioxidante total (2,36±0,32 versus 2,73±0,24mmol/L), enquanto não houve alteração da peroxidação lipídica plasmática e da produção de superóxido neutrofílica. Concluiu-se que, à semelhança do que ocorre na uremia, condições azotêmicas pré-renais no cão causam estresse oxidativo e aceleração da apoptose dos neutrófilos.(AU)

This study aims to test the hypothesis that, similarly to what occurs in uremia, dogs with prerenal azotemia suffer oxidative stress associated with changes in oxidative metabolism and apoptosis in neutrophils. For this purpose, fifteen normal dogs and ten with prerenal azotemia had lipid peroxidation determined by quantifying the malondialdehyde (MDA) and had plasma total antioxidant status evaluated, correlating them with the superoxide production and apoptotic index of neutrophils. MDA and plasma total antioxidant status were determined using commercial reagents. Using capillary flow cytometry, superoxide production and apoptosis were determined from isolated neutrophils of peripheral blood using the hydrithidine and Annexin V-PE probe system, respectively. Azotemic dogs (26.29±5.32g/L) had a lower concentration (p=0.0264) of the plasma antioxidant albumin than the control group (30.36±3.29g/L) and also had lower (p=0.0027) total antioxidant status (2.36±0.32 versus 2.73±0.24mmol/L), while no alterations were observed in plasma lipid peroxidation and superoxide production. It was concluded that, similarly to what occurs in uremia, prerenal azotemia causes oxidative stress and acceleration of neutrophil apoptosis in dogs.(AU)

Assuntos

RESUMO

O teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) é um dos métodos mais utilizados para se avaliar o metabolismo oxidativo dos neutrófilos em sangue total heparinizado. O etileno-diaminotetracético (EDTA) é o anticoagulante mais utilizado na rotina hematológica e apresenta a vantagem de melhor preservar as características morfológicas dos neutrófilos do que a heparina. Estudos prévios em humanos indicam que o EDTA pode quelar o cálcio necessário para a ativação do metabolismo oxidativo enquanto que a heparina pode gerar valores de redução de NBT falsamente elevados. Objetivou-se comparar a capacidade dos neutrófilos reduzirem o NBT em amostras sangüíneas colhidas com heparina e EDTA. Para tal, sangue total de 30 eqüinos SRD sadios, adultos e de ambos os sexo foram divididas em dois tubos, um contendo heparina sódica (10U/mL) e o outro EDTA potássico (1,8mg/mL). Imediatamente após a colheita realizaram-se os testes de redução espontânea e estimulada do NBT. Em ambas as provas de redução do NBT, amostras colhidas com heparina apresentaram maior destruição celular, formação de precipitado e de agregados celulares do que as tratadas com EDTA. A média de redução espontânea do NBT em amostras com EDTA (5,93%) não diferiu das obtidas com heparina (4,2%). Na prova estimulada, a média de neutrófilos redutores de NBT em amostras com EDTA (10,43%) foi menor ( p < 0,05) do que as obtidas

RESUMO

Objetivou-se comparar a capacidade dos neutrófilos reduzirem NBT em amostras sangüíneas colhidas com heparina e EDTA. Para tal, sangue total de 30 eqüinos SRD sadios, adultos e de ambos os sexo foram divididas em dois tubos, um contendo heparina sódica (10U/mL) e o outro EDTA potássico (1,8mg/mL). Imediatamente após a colheita realizaram-se os testes de redução espontânea e estimulada do NBT. Em ambas as provas de redução do NBT, amostras colhidas com heparina apresentaram maior destruição celular, formação de precipitado e de agregados celulares do que as tratadas com EDTA. A média de redução espontânea do NBT em amostras com EDTA (5,93%) não diferiu das obtidas com heparina (4,2%). Na prova estimulada, a média de neutrófilos redutores de NBT em amostras com EDTA (10,43%) foi menor (p<0,05) do que as obtidas com heparina (36,1%). Conclui-se que o EDTA pode ser utilizado com vantagens em relação à heparina na prova de redução espontânea do NBT, entretanto, efeito quelante deste anticoagulante compromete a produção de superóxido em neutrófilos estimulados com extrato bacteriano.

The aim of the present study was to compare the neutrophils ability to reduce NBT in blood samples collected with heparin and EDTA. For this purpose, blood samples from 30 horses were collected of non-defined mix breed, healthy, adults and from both sexes animals, the samples were divided into two tubes, one containing sodium heparin (10U/mL) and other potassium EDTA (1.8 mg/mL). Immediately after the blood collection, the tests of spontaneous and stimulated reduction of NBT were conducted. In both reducing NBT tests, heparinized samples had higher cell destruction, precipitate and cellular aggregates in comparison with those treated with EDTA. The average of spontaneous NBT reduction in samples with EDTA (5.93%) did not differ from those obtained with heparin (4.2%). In stimulated test, the NBT reduction average of neutrophils in samples with EDTA (10.43%) was lower (p <0.05) than those obtained with heparin (36.1%). It is concluded that EDTA can be used with advantages over heparin in the spontaneous NBT reduction test, however, the anticoagulant chelating effect compromises neutrophils superoxide production when stimulated with bacterial extract.

Assuntos