RESUMO
Objetivou-se avaliar a utilização da placa aquecedora, em substituição ao banho-maria, no teste de termorresistência (TTR) de espermatozoides de carneiros após a criopreservação. Foram coletados 10 ejaculados de três carneiros adultos (n=30), por meio de vagina artificial para ovinos. Em seguida, foram diluídos em TrisGema de ovo, a uma concentração final de 200 x106 sptz/mL, e submetidos á curva de resfriamento, para posterior criopreservação em palhetas em nitrogênio líquido. Após descongelação, as amostras foram analisadas quanto à integridade de membrana, de acrossoma e atividade mitocondrial. O sêmen então foi dividido em dois tubos e submetido ao TTR, um em banho-maria e outro em placa aquecedora, e, ainda, avaliado a cada 30 minutos, do tempo zero (pós-descongelação) até 90 minutos de incubação, a 37 °C, quanto à motilidade espermática e à motilidade progressiva. As variáveis foram submetidas à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. Após o processo de congelação/descongelação, os espermatozoides apresentaram baixo percentual de integridade de membrana e elevado percentual de atividade mitocondrial e integridade do acrossoma. Não foi observada diferença na motilidade espermática nem na motilidade progressiva ao longo do TTR, quando comparados os espermatozoides que foram incubados em banho-maria aos incubados em placa aquecedora durante o período de 90 minutos. A placa aquecedora pode ser utilizada como meio de incubação dos espermatozoides de carneiros em substituição ao banho-maria.
The objective was to evaluate the use of the hot plate to replace the water bath in the thermo resistance test of ovine sperm after cryopreservation. Ten ejaculates were also collected from three adult sheep (n=30), by means of artificial sheep vagina. The collected samples were diluted in Tris-Egg Yolk, at a final concentration of 200 x106 sptz/mL and subjected to a cooling curve for subsequent cryopreservation in liquid nitrogen straws. Immediately after thawing, the samples were analyzed for membrane and acrosome integrity, and mitochondrial activity. The semen was then divided into two tubes and submitted to TTR, one in a water bath and the other in a hot plate, and evaluated every 30 minutes, from time zero (post-thaw) until 90 minutes of incubation at 37 °C, for sperm motility and progressive motility. The variables were subjected to analysis of variance and the means were compared using the Tukey test at 5% probability. After the freeze/thawing process, sperm showed a low percentage of membrane integrity, high percentage of mitochondrial activity, in addition to maintaining the integrity of acrossome. No difference was observed in sperm motility nor progressive motility, along the TTR, when comparing the sperm that were incubated in a water bath in relation to those incubated in a hot plate during the period of 90 minutes. The heating plate can be used as a means of incubating sheep sperm in replacement of the water bath.
Assuntos
Animais , Ovinos , Criopreservação/veterinária , Equipamentos de Laboratório , Termotolerância , Coleta de Tecidos e Órgãos/veterináriaRESUMO
O uso de sêmen congelado apresenta menores índices de concepção e menor número de leitões nascidos por parto. Isso ocorre porque a criopreservação acarreta variações de temperatura, alteração da permeabilidade espermática e processos oxidativos, sendo que o sêmen suíno apresenta, naturalmente, baixa capacidade antioxidante e sofre estresse oxidativo. No entanto, vários crioprotetores são utilizados para diversas espécies e já é descrito o uso de colesterol, carreado com ciclodextrina, e de aminoácidos, visando a melhoria do sêmen após o descongelamento. A adição de colesterol ao sêmen, previamente à criopreservação, mantém a integridade da membrana acrossomal e retarda a capacitação espermática, feito que pode ser facilitado com o carreamento por ciclodextrina. Em paralelo, pesquisas apontam a importância do uso de aminoácidos no sêmen, que formam uma camada de proteção térmica que preserva a integridade da célula espermática, além de apresentarem função osmorregulativa. Nesse sentido, a viabilização da criopreservação do sêmen suíno favorece o melhoramento genético, minimiza a transmissão de patógenos e possibilita a formação de um banco de germoplasma. Para tanto, faz-se necessário o aprimoramento do uso de crioprotetores em uma proporção ideal, que mantenha a integridade da membrana espermática e não prejudique a capacitação espermática e a reação acrossomal, necessárias para a fecundação.(AU)
The use of frozen semen presents lower conception rates and fewer piglets born per birth. This is due to the fact that cryopreservation causes variations in temperature, changes in sperm permeability and oxidative processes, and the swine semen naturally presents low antioxidant capacity and undergoes oxidative stress. However, several cryoprotectants are used for several species, and the use of cyclodextrin and amino acid-loaded cholesterol is already described, aiming to improve the semen after thawing. The addition of cholesterol to the semen prior to cryopreservation maintains the integrity of the acrosomal membrane and slows sperm capacitation, which can be facilitated by cyclodextrin loading. In parallel, research indicates the importance of the use of amino acids in the semen, which form a layer of thermal protection that preserves the integrity of the sperm cell, in addition to presenting osmorregulatory function. In this sense, the viability of the cryopreservation of the swine semen favors the genetic improvement, minimizes the transmission of pathogens and allows the formation of a germplasm bank. Therefore, it is necessary to improve the use of cryoprotectants in an ideal proportion, which maintains the integrity of the sperm membrane and does not detract from the sperm capacitation and acrosomal reaction required for fertilization.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Criopreservação/métodos , Criopreservação/veterinária , Sêmen/química , Crioprotetores , SuínosRESUMO
O uso de sêmen congelado apresenta menores índices de concepção e menor número de leitões nascidos por parto. Isso ocorre porque a criopreservação acarreta variações de temperatura, alteração da permeabilidade espermática e processos oxidativos, sendo que o sêmen suíno apresenta, naturalmente, baixa capacidade antioxidante e sofre estresse oxidativo. No entanto, vários crioprotetores são utilizados para diversas espécies e já é descrito o uso de colesterol, carreado com ciclodextrina, e de aminoácidos, visando a melhoria do sêmen após o descongelamento. A adição de colesterol ao sêmen, previamente à criopreservação, mantém a integridade da membrana acrossomal e retarda a capacitação espermática, feito que pode ser facilitado com o carreamento por ciclodextrina. Em paralelo, pesquisas apontam a importância do uso de aminoácidos no sêmen, que formam uma camada de proteção térmica que preserva a integridade da célula espermática, além de apresentarem função osmorregulativa. Nesse sentido, a viabilização da criopreservação do sêmen suíno favorece o melhoramento genético, minimiza a transmissão de patógenos e possibilita a formação de um banco de germoplasma. Para tanto, faz-se necessário o aprimoramento do uso de crioprotetores em uma proporção ideal, que mantenha a integridade da membrana espermática e não prejudique a capacitação espermática e a reação acrossomal, necessárias para a fecundação.
The use of frozen semen presents lower conception rates and fewer piglets born per birth. This is due to the fact that cryopreservation causes variations in temperature, changes in sperm permeability and oxidative processes, and the swine semen naturally presents low antioxidant capacity and undergoes oxidative stress. However, several cryoprotectants are used for several species, and the use of cyclodextrin and amino acid-loaded cholesterol is already described, aiming to improve the semen after thawing. The addition of cholesterol to the semen prior to cryopreservation maintains the integrity of the acrosomal membrane and slows sperm capacitation, which can be facilitated by cyclodextrin loading. In parallel, research indicates the importance of the use of amino acids in the semen, which form a layer of thermal protection that preserves the integrity of the sperm cell, in addition to presenting osmorregulatory function. In this sense, the viability of the cryopreservation of the swine semen favors the genetic improvement, minimizes the transmission of pathogens and allows the formation of a germplasm bank. Therefore, it is necessary to improve the use of cryoprotectants in an ideal proportion, which maintains the integrity of the sperm membrane and does not detract from the sperm capacitation and acrosomal reaction required for fertilization.
Assuntos
Masculino , Animais , Criopreservação/métodos , Criopreservação/veterinária , Crioprotetores , Suínos , Sêmen/químicaRESUMO
This study evaluated the effect of adding different concentration of cholesterol-loaded-cyclodextrin (CLC) on sperm quality after thawing. Thirty ejaculates were diluted, centrifuged and resuspended to 120 million cells/mL in a Tris diluent. Semen was treated with 0 (Control), 0.75, 1.5, 3.0, 4.5, 6.0 or 7.5 mg of CLC. Then, the samples were cooled at 4ºC for 2 h, diluted with Tris-egg yolk and 2% glycerol, packaged into 0.5 mL straws, frozen in liquid nitrogen (N2) vapor for 20 min before being plunged into N2. Straws were thawed at 37ºC for 30 sec, and evaluated for thermal resistance test (TRT); progressive motility using CASA; hypoosmotic test and for binding capacity of sperm to perivitelline membrane (PM). The variables were determined using ANOVA at 5% probability. Higher percentage of motile sperm were maintained after thawing and TTR when 0.75 mg CLC was added, evaluated at 0, 60 and 120 min of incubation (50.4, 33.8 and 22.5%, respectively) compared to other treatments (P < 0.05). The percentage of coiling was higher in sperm treated with 6.0 and 7.0 mg of CLC than other treatments (P < 0.05). Addition of 0.75 mg CLCs also resulted in more sperm binding to the PM after cryopreservation than control sperm (166 vs 65; P < 0.05). However, when the spermatozoa binding potential was determined on a motile sperm basis by dividing the average number of spermatozoa bound to PM for each bucks by the percentage of motile spermatozoa, CLC treatment provided higher binding efficiency (1.52) than control (1.00; P<0.05). In conclusion, CLCs improved the percentage of post-thaw of motility in caprine sperm as well as increased the number of sperm that bind to PM. Addition of 0.75 mg of CLC to caprine sperm prior to cryopreservation improved the quality sperm motility for up to 2 h.(AU)
Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito da adição do colesterol carreado com a ciclodextrina (CCC) sobre a melhoria da qualidade espermática após a descongelação. Trinta ejaculados foram diluídos, centrifugados e ressuspendidos com Tris para concentração de 120 x 106 células/mL. O sêmen foi tratado com 0, 0,75, 1,5, 3,0, 4,5, 6,0 ou 7,5 mg de CCC. Em seguida, as amostras foram resfriadas a 4ºC durante 2 horas, diluídas com Tris-Gema de ovo e 2% de glicerol, envasadas e colocadas sobre o vapor do nitrogênio líquido (N2) por 20 min e depois mergulhadas no N2 . As amostras foram descongeladas a 37ºC por 30s, e avaliadas quanto: o teste de termorresistência (TRT); motilidade progressiva utilizando CASA; teste hiposmótico e a capacidade de ligação dos espermatozoides à membrana perivitelina (MP). As variáveis foram analisadas por meio da ANOVA e os tratamentos comparados a 5% de probabilidade. A motilidade dos espermatozoides (50,4; 33,8 e 22,5%) foi maior nas amostras tratadas com 0,75 mg de CCC após 0, 60 e 120 min de incubação quando comparado com demais tratamentos (P < 0,05). As amostras tratadas com 6,0 e 7,0 mg de CCC apresentaram maior dobramento de cauda que os demais tratamentos (P < 0,05). A capacidade de ligação dos espermatozoides a MP foi maior no tratamento com 0,75 mg CCC comparado ao controle (166 vs 65; P < 0,05). No entanto, quando o potencial de ligação dos espermatozoides foi determinado dividindo o número médio de espermatozoides ligados a MP sobre o percentual de espermatozoides móveis, o tratamento com CCC proporcionou maior eficiência (1,52) do que o controle (1,00; P < 0,05). A adição de 0,75 mg de CCC no sêmen fresco de caprino antes da criopreservação melhorou a motilidade espermática após a criopreservação até 2 horas.(AU)
Assuntos
Animais , Colesterol/administração & dosagem , Ciclodextrinas/administração & dosagem , Ruminantes , Criopreservação/veterinária , Motilidade dos Espermatozoides , Análise do SêmenRESUMO
Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito da adição do colesterol carreado com a ciclodextrina (CCC) sobre a melhoria da qualidade espermática após a descongelação. Trinta ejaculados foram diluídos, centrifugados e ressuspendidos com Tris para concentração de 120 x 106 células/mL. O sêmen foi tratado com 0, 0,75, 1,5, 3,0, 4,5, 6,0 ou 7,5 mg de CCC. Em seguida, as amostras foram resfriadas a 4°C durante 2 horas, diluídas com Tris-Gema de ovo e 2% de glicerol, envasadas e colocadas sobre o vapor do nitrogênio líquido (N2 ) por 20 min e depois mergulhadas no N2 . As amostras foram descongeladas a 37°C por 30s, e avaliadas quanto: o teste de termorresistência (TRT); motilidade progressiva utilizando CASA; teste hiposmótico e a capacidade de ligação dos espermatozoides à membrana perivitelina (MP). As variáveis foram analisadas por meio da ANOVA e os tratamentos comparados a 5% de probabilidade. A motilidade dos espermatozoides (50,4; 33,8 e 22,5%) foi maior nas amostras tratadas com 0,75 mg de CCC após 0, 60 e 120 min de incubação quando comparado com demais tratamentos (P<0,05). As amostras tratadas com 6,0 e 7,0 mg de CCC apresentaram maior dobramento de cauda que os demais tratamentos (P<0,05). A capacidade de ligação dos espermatozoides a MP foi maior no tratamento com 0,75 mg CCC comparado ao controle (166 vs 65; P <0,05). No entanto, quando o potencial de ligação dos espermatozoides foi determinado dividindo o número médio de espermatozoides ligados a MP sobre o percentual de espermatozoides móveis, o tratamento com CCC proporcionou maior eficiência (1,52) do que o controle (1,00; P < 0,05). A adição de 0,75 mg de CCC no sêmen fresco de caprino antes da criopreservação melhorou a motilidade espermática após a criopreservação até 2 horas.