RESUMO
This study was conducted to evaluate the immunogenicity of the Brucella abortus lumazine synthase (BLS) gene cloned into the pcDNA3 plasmid, which is driven by the cytomegalovirus promoter. Injection of plasmid DNA carrying the BLS gene (pcDNA-BLS) into BALB/c mice elicited both humoral and cellular immune responses. Antibodies to the encoded BLS included immunoglobulin G1 (IgG1) IgG2a, IgG2b, IgG3, and IgM isotypes. Animals injected with pcDNA-BLS exhibited a dominance of IgG2a over IgG1. In addition, spleen cells from vaccinated animals produced interleukin-2 and gamma interferon but not IL-10 or IL-4 after in vitro stimulation with recombinant BLS (rBLS), suggesting the induction of a Th1 response. Protection was evaluated by comparing the levels of infection in the spleens of vaccinated mice challenged with B. abortus 544. Immunization with pcDNA-BLS- reduced the bacterial burden relative to those in the control groups. Mice immunized with rBLS produced a significant humoral response but did not show a specific cellular response or any protection from challenge. Altogether, these data suggest that pcDNA-BLS is a good immunogen for the production of humoral and cell-mediated responses in mice and is a candidate for use in future studies of vaccination against brucellosis.
Assuntos
Vacina contra Brucelose/imunologia , Brucella abortus/imunologia , Brucelose/prevenção & controle , Complexos Multienzimáticos/genética , Vacinas de DNA/imunologia , Animais , Anticorpos Antibacterianos/sangue , Brucella abortus/enzimologia , Feminino , Imunização , Imunoglobulina G/sangue , Imunoglobulina G/classificação , Camundongos , Camundongos Endogâmicos BALB C , Complexos Multienzimáticos/imunologia , Proteínas Recombinantes/imunologia , Células Th1/imunologia , Vacinas Sintéticas/imunologiaRESUMO
A study was conducted to evaluate the immunogenicity of the Brucella melitensis ribosome recycling factor (RRF)-homologous protein (CP24). The CP24 gene was cloned, expressed in Escherichia coli and purified. The resulting purified recombinant protein (rCP24) produced delayed-type hypersensitivity (DTH) reactions in B. melitensis-infected mice but not in naive controls. Thus, we decided to characterise the immune responses generated with DNA vaccination (pcDNACP24) or immunisation with the rCP24 in adjuvant. Animals injected with pcDNACP24 exhibited a dominance of IgG2a to IgG1 while mice injected with rCP24 developed a higher response of IgG1 than IgG2a. Both immunisation protocols were capable of eliciting CP24-specific gamma interferon (IFN-gamma) producing cells. Spleen cells from pcDNACP24-immunised mice did not produce interleukin (IL)-4, IL-10 or up-regulation of IL-2 mRNA. Cells from rCP24-immunised mice produced IL-10, up-regulated IL-2 mRNA but did not produce IL-4. Neither immunisation with purified CP24 nor injection of pcDNACP24 protected mice against challenge with live smooth B. melitensis. However, the potential of CP24 for a Brucella diagnostic test based on an in vitro antigen (Ag)-specific IFN-gamma production or DTH test would be worth testing.
Assuntos
Proteínas de Bactérias/genética , Proteínas de Bactérias/imunologia , Vacina contra Brucelose/imunologia , Brucella melitensis/genética , Brucella melitensis/imunologia , Animais , Anticorpos Antibacterianos/biossíntese , Sequência de Bases , Vacina contra Brucelose/genética , Células COS , Clonagem Molecular , Citocinas/biossíntese , Citocinas/genética , DNA Bacteriano/genética , DNA Complementar/genética , Escherichia coli/genética , Feminino , Expressão Gênica , Genes Bacterianos , Hipersensibilidade Tardia , Imunização , Imunoglobulina G/biossíntese , Ativação Linfocitária , Camundongos , Camundongos Endogâmicos BALB C , Proteínas Recombinantes/genética , Proteínas Recombinantes/imunologia , Linfócitos T/imunologia , Transfecção , Vacinas de DNA/genética , Vacinas de DNA/imunologia , Vacinas Sintéticas/genética , Vacinas Sintéticas/imunologiaRESUMO
Las vacunas génicas o de ADN desnudo, que aún se hallan en el campo experimental, constituyen el avance más importante en la historia de la vacunología. Los poderes inmunizantes y protectores que estas vacunas inducen están claramente establecidos, en ensayos preclínicos, en animales experimentales. Además se está estudiando su capacidad terapéutica. Se ha avanzado mucho en el conocimiento de las vías y los métodos de inmuzación, pero aún se desconocen los mecanismos de transfección del plásmido y, lo que es muy importante, cuál o cuáles son las células transfectadas capaces de provocar en el vacunado, una respuesta a células citotóxicas y anticuerpos. Hay evidencias experimentales que afirman la importancia de los miocitos, los queratinocitos o las células dendríticas como factores principales de esta respuesta inmune. Otros experimentos sugieren dudas sobre cada uno de estos participantes. El objeto de esta revisión es presentar el estado actual del conocimiento sobre los tipos de células que pueden ser transfectadas, que expresan el gen y presentan el antígeno vacunante en una respuesta inmune a ADN desnudo. Lo más probable es que no sea una y la misma célula, la transfectada y la que presenta el péptido inmunizante en MHC clase I y II. Un paso importante para el conocimiento del mecanismo de inmunización por ADN sería el esclarecimiento del mecanismo de transfección del plásmido de ADN bacteriano. ¿Habrá algún tipo celular con receptores específicos que incorporen el plásmido, lo expresen y transfieran su producto a las células presentadoras de antígeno?
Assuntos
Plasmídeos/imunologia , Transfecção/imunologia , Vacinas de DNA/imunologia , Músculo Esquelético/imunologia , Pele/imunologiaRESUMO
Las vacunas génicas o de ADN desnudo, que aún se hallan en el campo experimental, constituyen el avance más importante en la historia de la vacunología. Los poderes inmunizantes y protectores que estas vacunas inducen están claramente establecidos, en ensayos preclínicos, en animales experimentales. Además se está estudiando su capacidad terapéutica. Se ha avanzado mucho en el conocimiento de las vías y los métodos de inmuzación, pero aún se desconocen los mecanismos de transfección del plásmido y, lo que es muy importante, cuál o cuáles son las células transfectadas capaces de provocar en el vacunado, una respuesta a células citotóxicas y anticuerpos. Hay evidencias experimentales que afirman la importancia de los miocitos, los queratinocitos o las células dendríticas como factores principales de esta respuesta inmune. Otros experimentos sugieren dudas sobre cada uno de estos participantes. El objeto de esta revisión es presentar el estado actual del conocimiento sobre los tipos de células que pueden ser transfectadas, que expresan el gen y presentan el antígeno vacunante en una respuesta inmune a ADN desnudo. Lo más probable es que no sea una y la misma célula, la transfectada y la que presenta el péptido inmunizante en MHC clase I y II. Un paso importante para el conocimiento del mecanismo de inmunización por ADN sería el esclarecimiento del mecanismo de transfección del plásmido de ADN bacteriano. ¿Habrá algún tipo celular con receptores específicos que incorporen el plásmido, lo expresen y transfieran su producto a las células presentadoras de antígeno? (Au)