RESUMO
ABSTRACT During the last ten years the Neospora caninum infection have emerged as an important reproductive disease in cattle, and in several countries has been the main cause of abortion. Considering the importance of the disease our aim was to perform a morphological analysis ofin vitrofertilized bovine embryos experimentally exposed to Neospora caninum. The embryos were produced from oocytes harvested from ovaries collected in slaughterhouse. They were divided in 2 groups: control, kept with HTF medium, and infected with 10µL of N. caninum. The embryos were kept in CO2 incubator during 48 and 96h. The observations were performed under inverted optical microscope. There were no morphological changes in the control group. The infected group presented cytoplasm with dark granulation, cleavage blockage and pelucide zone (ZP) rupture. In some cases, taquizoite like structures were visualized under the ZP. Those results showed that there is an interaction between the embryo and the pathogen,probably by means of an initial process of binding with the ZP, which eventually allows its entrance under the ZP. The current study becomes relevant when we take into account the possibility of Neospora caninum transmission via animal reproduction techniques.
RESUMO Durante a última década, a infecção por Neospora caninum tem emergido como uma importante doença reprodutiva em bovinos e, em vários países, tem sido diagnosticada como principal causa de aborto. Tendo em vista a importância dessa doença esse trabalho teve como objetivo avaliar morfologicamente embriões bovinos produzidos in vitro infectados experimentalmente por N. caninum. Os embriões foram produzidos in vitro a partir de oócitos colhidos de ovários de bovinos provenientes de abatedouro. Foram separados em grupo controle, mantido somente com meio HTF e grupo infectado com 10 mL de N. caninum. Os embriões foram avaliados após 48 e 96h em microscópio óptico invertido. Os embriões do grupo controle não apresentaram alterações morfológicas. No grupo infectado foi verificado o aparecimento de grânulos escuros no citoplasma, bloqueio da clivagem e ruptura da zona pelúcida (ZP). Em alguns casos, observou-se estruturas semelhantes a taquizoitos de N. caninum no interior da ZP. Esses resultados sugerem que, de alguma maneira há a interação do patógeno com o embrião, talvez em um processo inicial de ligação com a ZP, promovendo posteriormente sua entrada. Esses estudos tornam-se relevantes quando se leva em consideração a possível transmissão da N. caninum por técnicas conceptivas artificiais.
RESUMO
RESUMO O objetivo desse estudo foi verificar a ocorrência do herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) no líquido folicular de ovários e células epiteliais de oviduto bovino colhidos de abatedouro. Foi realizada a reação de polimerase em cadeia (nested PCR) das amostras resultantes de 12 colheitas, utilizando primers que amplificam o gene da glicoproteína B (gB) do BoHV-1. Uma amostra de líquido folicular apresentou reação positiva enquanto as amostras de células epiteliais de oviduto bovino apresentaram reações negativas. Este resultado é de grande relevância, pois o BoHV-1 constitui um risco para a produção in vitro de embriões, tendo como conseqüência a mortalidade embrionária que é uma importante causa de falha reprodutiva e tem profundo impacto na produção animal.
ABSTRACT The objective of that study was to verify the incidence of the bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) in follicular fluid and bovine oviduct epithelial cells of slaughterhouse animals. There were 12 collections and a total of 138 ovaries, after extraction with the protein k enzyme, the samples were amplified, and internal fragment of the gene of the gB of BoHV-1 was used. A sample of follicular fluid presented a band of 175pb being shown positive to the test, while the samples of bovine oviduct epithelial cells, were all verified negatives. This discovery is of great relevance, because BoHV-1 constitutes a risk for the production of embryos in vitro. Leading to embryonic mortality, which has a deep impact in the animal production.
RESUMO
RESUMO O objetivo desse trabalho foi avaliar a sensibilidade de zigotos murinos ao herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1), visando a obtenção de um modelo in vitro para estudos sobre a interação embriãovírus e sobre o potencial risco de transmissão de viroses através da técnica de fertilização in vitro (FIV). Foram utilizados camundongos fêmeas (Balb C) entre 6-8 semanas de idade, superovuladas com os hormônios eCG e hCG, acasaladas com machos inteiros para colheita dos zigotos. Esses foram separados em 3 grupos, controle e exposto 24h a duas concentrações da suspensão viral (10 µL e 30 µL). Cada grupo foi dividido para análise da morfologia e para avaliação da presença de partículas virais empregando a reação em cadeia pela polimerase (PCR), após o procedimento de lavagens seqüenciais e tratamento com tripsina. De acordo com os resultados obtidos, os zigotos murinos poderão fornecer subsídios como modelo experimental para estudos sobre a biologia das interações embrião-vírus, uma vez que se apresentaram sensíveis ao BoHV-1.
ABSTRACT The aim of this work was to evaluate mouse zygote susceptibility to BoHV-1, to obtain an in vitro model, to allow studies about embryo-virus interaction and the potential risk of the transmission of the virus through IVF techniques. Female mice (Balb C) aged 6-8 weeks were superovulated with the hormones eCG and hCG and mated for zygotes retrieval. The zygotes were divided in 3 groups: control and exposed to the virus for 24h (two different concentrations -10 µL and 30 µL). Each group was divided for morphological evaluation and polymerase chain reaction (PCR) analysis was performed after sequential washing procedures with trypsin treatment. According to the results, mouse zygotes could be used as an experimental model for embryo-virus biology interaction studies.