RESUMO
In this work, an indirect ELISA based on a monoclonal antibody (MAb) specific for an outer membrane protein of Salmonellaenterica serovar Enteritidis was used for detection of Salmonella in 154 samples of chicken meat. Its efficiency was determined through comparison with the results obtained from the conventional method. The prevalence of samples contaminated with Salmonella was 23% with the conventional culture method, and 26% with the ELISA. From thirty-five samples positive for Salmonella by the conventional method, 33 were also positive by ELISA. Seven other samples were only positive in the ELISA. Comparison of the results obtained in the two methods showed an ELISA sensitivity and specificity of 94%, and positive and negative predictive values of 82% and 98% respectively. The serotyping of the isolates revealed 31 Salmonella enterica serovar Enteritidis, 2 Salmonella enterica serovar Heidelberg, 1 Salmonella enterica serovar Choleraesuis and 1 Salmonella enterica sorovar 6,7:-:-.
Neste trabalho, um ELISA indireto baseado em um anticorpo monoclonal (MAb) especifico para proteína de membrane externa de Salmonellaenterica serovar Enteritidis foi usado para detecção de Salmonella em 154 amostras de carne de frango. Sua eficiência foi determinada através de comparação com os resultados obtidos pela metodologia convencional. A prevalência de amostras contaminadas com Salmonella foi de 23% pelo método de cultivo convencional, e 26% pelo ELISA. De 35 amostras positivas para Salmonella pela metodologia convencional, 32 também foram positivas no ELISA. Outras sete amostras foram positivas somente no ELISA. Comparando os resultados obtidos nos dois métodos, o ELISA demonstrou sensibilidade e especificidade de 94%, e valor preditivo positivo e negativo de 82% e 98% respectivamente. A sorotipagem dos isolados revelou 31 Salmonella enterica serovar Enteritidis, 2 Salmonella enterica serovar Heidelberg, 1 Salmonella enterica serovar Choleraesuis e 1 Salmonella enterica sorovar 6,7:-:-.
RESUMO
A panel of 13 monoclonal antibodies (MAbs) that react against outer membrane proteins of Salmonella Enteritidis was obtained. Two MAbs were classified as IgM, six were IgG2a, three were IgG3 and one was of the IgG2b isotype. The reactivity of the MAbs against different serovars of Salmonella enterica and other bacteria was investigated using an indirect ELISA. Five MAbs reacted only against Salmonella Enteritidis. Two MAbs presented crossed reactions with thermo-extracted antigens of Klebsiella pneumoniae, Citrobacter freundii and Enterobacter aerogenes. MAb 424H presented wide spectrum of reactivity, detecting antigens of Salmonella belonging to serogroups B, C, D, E and G. The detection limit of different serovars of Salmonella in a indirect ELISA with MAb 424H varied from 1.0 x 10(4) CFU/mL for Salmonella London to 1.4 x 10(6) CFU/mL for Salmonella Gallinarum and Salmonella Typhimurium. Evaluation of the performance of the ELISA with MAb 424H in the detection of Salmonella in samples of chicken meat artificially contaminated revealed that the ELISA was able to detect all serovars after sample enrichment using two levels of contamination. Samples of chicken meat not artificially contaminated analysed in parallel were negative for Salmonella in both the conventional and the ELISA methods.
Foi obtido um painel de 13 anticorpos monoclonais que reagem com proteínas de membrana externa de Salmonella Enteritidis. Dois MAbs foram classificados como IgM, 6 foram do isotipo IgG2a, três foram do isotipo IgG3 e um do isotipo IgG2b. A reatividade dos anticorpos monoclonais (MAbs) com diferentes sorovares de Salmonella e outras bactérias foi investigada através de um ELISA indireto. Cinco MAbs reagiram apenas com Salmonella Enteritidis. Dois MAbs apresentaram reação cruzada com antígenos termoextraídos de Klebsiella pneumoniae, Citrobacter freundii e Enterobacter aerogenes. O MAb 424H apresentou amplo espectro de reatividade, detectando antígenos de Salmonella pertencentes aos sorogrupos B, C, D, E, e G. O limite de detecção de diferentes sorovares de Salmonella em um ELISA indireto com o MAb 424H variou de 1,0 x 10(4) UFC/mL para Salmonella London a 1,4 x 10(6) UFC/mL para Salmonella Gallinarum e Salmonella Typhimurium. A avaliação do desempenho do ELISA indireto com o MAb 424H na detecção de diferentes sorovares de Salmonella em amostras de carne de frango, mostrou ser possível detectar todos os sorovares após o enriquecimento das amostras, nos três níveis de contaminação utilizados. A análise de alíquotas de amostras de carne de frango não contaminadas artificialmente, feita em paralelo, foi negativa para Salmonella tanto no método convencional quanto no ELISA.