RESUMO
As nanofibras (NF) podem ser sintetizadas por meio de eletrofiação, um método simples que permite incorporação de fármacos em biopolímeros que apresentam a vantagem de serem liberados de forma gradual. Policaprolactona (PCL) apresenta a vantagem de poder ser eletrofiada permitindo a incorporação de fármacos. Os ácidos retinoicos são fármacos empregados no tratamento de osteossarcoma, mas, apresentam efeitos colaterais. O ATRA (all-trans-retinoicacid) é o mais comum entre os retinoides. Os objetivos deste estudo foram: sintetizar e caracterizar NF, incorporar o fármaco a elas e verificar a liberação ao meio de cultura; realizar testes de citoxicidade e genotoxicidade tais como: crescimento, integridade, viabilidade e micronúcleo de células MG63 tratadas com NF incorporada com ATRA e analisar a secreção das citocinas pró inflamatórias: IL-1ß, IL-6 e TNF-α por meio do teste ELISA. As NF sintetizadas por meio da eletrofiação foram caracterizadas morfologicamente e bioquimicamente por meio de microscopia eletrônica de varredura (MEV) e estudo do espectro de infravermelho da transformada de Fourrier (FTIR): Os testes in vitro foram realizados utilizando uma linhagem de células imortalizadas de osteossarcoma, MG63. Os ensaios incluídos nesse estudo foram divididos em grupos compostos por: [C (controle puro), ATRA (controle positivo), NF (controle negativo) e NF + ATRA (grupo experimental).] Em todos os grupos foram realizados testes de viabilidade celular (MTT), micronúcleo e ELISA sob os tempos de 3, 7 e 14 dias. A liberação do fármaco através do sistema de NF+ATRA foi comprovada pelo FTIR. Os demais resultados encontrados foram avaliados através do teste ANOVA one-way, no qual o método apresentou-se eficiente, mostrando diferença estatística de p=0,00, sendo signficante para todos os períodos de tempo nos testes de MTT e MN, além de ser verificada a secreção de citocinas proinflamatórias IL-1ß e IL-6, comprovando os efeitos citotóxicos e genotoxicos sob células MG63 mostrando a efetividade da técnica. Podendo ser uma alternativa para o tratamento(AU)
Nanofibers (NF) can be synthesized by electro-spinning, a simple method that allows incorporation of drugs into biopolymers that have the advantage of being released gradually. Polycaprolactone (PCL) has the advantage that it can be electrophied allowing the incorporation of drugs. Retinoic acids are drugs used in the treatment of osteosarcoma, but have side effects. ATRA (all-trans-retinoicacid) is the most common retinoid. The objectives of this study were: to synthesize and characterize NF, to incorporate the drug to them and to verify the release to the culture medium; perform cytotoxicity and genotoxicity tests such as: growth, integrity, viability and micronucleus of N63-treated NF-treated cells with ATRA and to analyze the secretion of pro-inflammatory cytokines: IL-1ß, IL-6 and TNFα by the ELISA . The NF synthesized by electrophilation were characterized morphologically and biochemically by scanning electron microscopy (SEM) and Fourrier Transform Infrared Spectrum (FTIR) study: In vitro tests were performed using an immortalized osteosarcoma cell line, MG63. The trials included in this study were divided into groups composed of: C (pure control), ATRA (positive control), NF (negative control) and NF + ATRA (experimental group). All groups were tested for cell viability (MTT), micronucleus and ELISA under the times of 3, 7 and 14 days. Release of the drug through the NF + ATRA system was confirmed by FTIR. The other results were evaluated using the oneway ANOVA test, in which the method was efficient, showing a statistical difference of p = 0.00, being significant for all time periods in the MTT and MN tests, besides the secretion of proinflammatory cytokines IL-1ß and IL-6, proving the cytotoxic and genotoxic effects under MG63 cells, showing the effectiveness of the technique. It may be an alternative to treatment(AU0
Assuntos
Humanos , Osteossarcoma , Nanofibras/classificação , Cultura Primária de Células/classificaçãoRESUMO
Apesar do sucesso da terapia com Ácido All-Trans Retinóico (ATRA) nos pacientes portadores de leucemia promielocítica aguda (LPA), ainda existem questões clínicas relevantes a serem solucionadas. A morte precoce é um evento que acomete até 30% dos pacientes recém-diagnosticados com LPA, assim como a recidiva da doença pode ser vista em cerca de » dos pacientes. Dessa forma, possíveis mecanismos moleculares subjacentes a esses eventos têm sido investigados. A presença da mutação FLT3-ITD ao diagnóstico parece estar relacionada à maior incidência de desfechos clínicos desfavoráveis, sobretudo morte precoce. Recentes trabalhos têm associado mutações no gene FLT3 à coagulopatia principal causa de morte na indução nos pacientes com LPA. Todavia, a forte associação da mutação FLT3-ITD com valores mais altos de leucometria ao diagnóstico (≥ 10.000 x103/mm3) classicamente um marcador de mau prognóstico tem dificultado a análise precisa do papel preditivo da mutação FLT3-ITD nesta população. Adicionalmente, possíveis mecanismos de resistência celular ao processo de diferenciação induzido pelo ATRA poderiam estar relacionados à pior evolução clínica. Escassos estudos têm apontado que mutações pontuais no domínio de ligação do ATRA no gene RARα detectadas no momento de recaída estão relacionadas à resistência secundária ao ATRA. Entretanto, essas mutações não foram amplamente investigadas em casos de pacientes que evoluíram com morte precoce como possível causa de resistência primária ao ATRA. Além disso, o valor preditivo da carga do transcrito PML-RARα detectada ao diagnóstico e em diferentes fases do tratamento ainda é incerto na evolução clínica desses pacientes, sobretudo na população pediátrica...
Despite the success of therapy with All-Trans Retinoic Acid (ATRA) in patientswith acute promyelocytic leukemia (APL), there are still relevant clinical issues to be resolved. Early death is an event that affects up to 30% of newly diagnosed patients with APL, as well as the recurrence of the disease can be seen in about a quarter of patients. Therefore, molecular mechanisms underlying these events have beeninvestigated. The presence of the FLT3-ITD mutation at diagnosis appears to berelated to a higher incidence of adverse clinical outcomes, especially early death. Recent studies have associated mutations in the FLT3 gene with coagulopathy - leading cause of death in the induction in patients with APL. However, the strong association of FLT3-ITD mutation with higher values of white blood cell count at diagnosis (≥ 10,000 x103 / mm3) - classically a worse prognostic marker - has made itdifficult to accurately analyze the predictive role of FLT3-ITD mutation in this population. In addition, possible mechanisms of resistance to the process of differentiation induced by ATRA could be related to worse clinical outcome. Few studies have shown that mutations in the ATRA-binding domain in the RARα gene detected in relapse time are related to secondary resistance to ATRA. However, these changes have not been widely investigated in cases of patients who developed early death - as a possible cause of primary resistance to ATRA. In addition, the predictive value of the load of PML-RARα transcript detected at diagnosis and atdifferent stages of treatment is uncertain in outcome of these patients, especially in children...
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Tretinoína , Mortalidade Prematura , Leucemia Promielocítica Aguda , MutaçãoRESUMO
En los últimos 20 años, y gracias a la efectividad del ácido retinoico todo en trans (ATRA), medicamento introducido por investigadores chinos en el tratamiento de la leucemia promielocítica, esta variedad de leucemia pasó de ser la más agresiva y de peor pronóstico por su alta mortalidad, a ser en la que se logra una mayor sobrevida y posibilidad de curación; pero a pesar de las bondades de este medicamento, aproximadamente el 20 por ciento de los pacientes pueden tener una recaída tanto hematológica como molecular en algún momento de la evolución de la enfermedad. Nuevamente investigadores chinos demostraron los beneficios del trióxido de arsénico (TOA), medicamento que por diferentes vías logra la maduración y diferenciación del promielocito leucémico y finalmente la desaparición del gen anormal PML/RARá y de su proteína híbrida. En los primeros trabajos realizados, el trióxido de arsénico se utilizó en los pacientes que tenían algún tipo de recaída o en aquellos que no respondían al ATRA y se logró alrededor del 80 por ciento de remisiones hematológicas y moleculares en estos enfermos; posteriormente varios grupos de trabajo han reportado resultados similares. Ante estos resultados, el TOA se comenzó a utilizar como droga de primera línea con excelentes resultados.
In the last 20 years and thanks to the effectivity of all-trans retinoic acid (ATRA), a drug introduced by Chinese researchers in the treatment of promyelocytic leukemia, this variety of leukemia that was the most aggressive and had the poorest prognosis due to its high mortality, has showed the highest survival and possibility of cure. In spite of its benefits, at about 20 percent of the patients may have a relapse both hematological and molecular some time during the evolution of the disease. Once again, the Chinese researchers showed the benefits or arsenic trioxide, a drug that allows by different routes the maturation and differentiation of leukemic promyelocite and, finally, the disappearance of the abnormal PML/RAR? gene and of its hybrid protein. In the first trials, arsenic trioxide was used in patients with some type of relapse or in those who did not respond to ATRA. 80 percent of hematological and molecular remissions were observed in these patients. Similar outcomes have been reported by various groups. According to its effects, it is being used as a first-line drug with excellent results.