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This study aimed to evaluate the effectiveness of using two ozone applications (gaseous and mist) as a disinfection method for fresh persimmon. To test these sanitizers, in vitro and in vivo assays were performed, and the Escherichia coli was selected because it is a pathogen that causes foodborne diseases in humans. For in vitro experiments, a plate was inoculated with Escherichia coli strain ATCC 25922 and treated. For in vivo assays, persimmon fruit surface was inoculated with the bacteria and treated. For both assays, it was used 10,15,20,30,40 and 50 µL L-1 of gaseous ozone or ozonized mist for five minutes. The results demonstrated that the gas ozone application significantly reduced the growth of E. coli on the plate surface in vitro at doses of 30, 40 and 50 µL L-1 (with 0.83, 0.89 and 0.95 log CFU mL-1, respectively). The application of ozonized mist showed a significant reduction for 50 µL L-1 (with 1.28 log CFU g-1). And, for the in vivo assays, ozonized mist significantly reduced the number of bacteria on the persimmon surface, with a 1.57 log reduction, which was the largest for 40 µL L-1. Therefore, it is possible to conclude that the ozone application can contribute to the control of microorganisms present on fruit surfaces.

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Persimmon (Diospyros kaki) anthracnose is a major threat in production areas worldwide. Most of the studies are focused on Colletotrichum horii, but other species have been reported as well. The association of distinct Colletotrichum species present in Brazilian persimmon production regions as well as their host ranges are yet elusive. The aims of this work were to identify and characterize Colletotrichum species associated with the persimmon anthracnose. In a survey performed in four production regions of Brazil, 88.7% and 11.3% out of 231 isolates were identified as members of Colletotrichum gloeosporioides species complex (Cgc) or Colletotrichum acutatum species complex (Cac), respectively. A subset of 18 isolates were identified through multilocus phylogenetic analysis, using ITS-rDNA region and two loci, namely GAPDH and TUB2. This study revealed the presence of four species: C. horii (38.8%) and Colletotrichum fructicola (27.7%) from the Cgc and Colletotrichum nymphaeae (27.7%) and Colletotrichum melonis (5.8%), from the Cac. Additionally, 13 isolates were selected for morphological, physiological, and pathogenic analyses. Contrasting characteristics were observed among species of the Cgc and Cac complexes. The optimal temperature for mycelial growth and germination were higher for Cgc species. The percentage of appressoria melanisation also varied across complexes. All the identified species were able to cause anthracnose-like symptoms on persimmon fruit, leaves, shoots, and sepals. Colletotrichum species from persimmon were also able to infect apple and pear. The findings will support decisions to manage anthracnose of persimmon under high infection risk due to multiple host susceptibility.

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This study identified physiological and biochemical changes in 'Fuyu' persimmon buds during dormancy. Branches were collected between March and August 2015. Dormancy was evaluated by biological testing of isolated node cuttings at 25 °C and a photoperiod of 16 h. The variables analyzed were water content; reducing sugar content; respiratory activity; activity of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), ascorbate peroxidase (APX), guaiacol peroxidase (POD) and polyphenol oxidase (PPO) enzymes; hydrogen peroxide content (H2O2) and lipid peroxidation. At the end of March 2015, the plants were already dormant, and the leaves and fruits present indicated a paradormancy effect. Induction of endodormancy may have occurred in June 2015, when chilling hours (CH) below 7.2 °C and higher CH below 12 °C began to accumulate, which coincided with the period in which there was a decrease in water content and respiratory activity, an increase in reducing sugars, a decrease in SOD, CAT, APX and PPO and an increase in H2O2. After an accumulation of 553 CH below 12 °C, the budburst capacity increased, and the buds presented increased water content, decreased reducing sugars content, increased respiratory activity, low activity in SOD, CAT, APX and POD and high levels of H2O2.(AU)

O objetivo deste trabalho foi identificar alterações fisiológicas e bioquímicas em gemas de caquizeiro 'Fuyu' durante a dormência. Ramos foram coletados entre março e agosto de 2015. A dormência foi avaliada pelo teste biológico de estacas de nós isolados, a 25 °C e fotoperíodo de 16 h. As variáveis analisadas foram umidade ponderal, teor de açúcares solúveis, atividade respiratória, atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), ascorbato peroxidase (APX), guaiacol peroxidase (POD) e polifenoloxidase (PPO), teor de peróxido de hidrogênio (H2O2) e peroxidação lipídica. No final de março de 2015 as plantas já estavam dormentes, as folhas e frutos presentes indicam efeito de paradormência. A indução da endodormência pode ter ocorrido em junho de 2015, quando iniciou acúmulo de horas de frio (HF) abaixo de 7,2 °C e maiores HF abaixo de 12 °C, que coincidiu com o período que houve diminuição da umidade e da atividade respiratória, aumento dos açúcares redutores, diminuição da atividade da SOD, CAT, APX e PPO e aumento de H2O2. Após acúmulo de 553 HF abaixo de 12 °C, a capacidade de brotação aumentou e as gemas apresentaram aumento da umidade, diminuição do teor de açúcares redutores, aumento da atividade respiratória, baixa atividade da SOD, CAT, APX e POD e elevados teores de H2O2.(AU)

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This study identified physiological and biochemical changes in 'Fuyu' persimmon buds during dormancy. Branches were collected between March and August 2015. Dormancy was evaluated by biological testing of isolated node cuttings at 25 °C and a photoperiod of 16 h. The variables analyzed were water content; reducing sugar content; respiratory activity; activity of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), ascorbate peroxidase (APX), guaiacol peroxidase (POD) and polyphenol oxidase (PPO) enzymes; hydrogen peroxide content (H2O2) and lipid peroxidation. At the end of March 2015, the plants were already dormant, and the leaves and fruits present indicated a paradormancy effect. Induction of endodormancy may have occurred in June 2015, when chilling hours (CH) below 7.2 °C and higher CH below 12 °C began to accumulate, which coincided with the period in which there was a decrease in water content and respiratory activity, an increase in reducing sugars, a decrease in SOD, CAT, APX and PPO and an increase in H2O2. After an accumulation of 553 CH below 12 °C, the budburst capacity increased, and the buds presented increased water content, decreased reducing sugars content, increased respiratory activity, low activity in SOD, CAT, APX and POD and high levels of H2O2.

O objetivo deste trabalho foi identificar alterações fisiológicas e bioquímicas em gemas de caquizeiro 'Fuyu' durante a dormência. Ramos foram coletados entre março e agosto de 2015. A dormência foi avaliada pelo teste biológico de estacas de nós isolados, a 25 °C e fotoperíodo de 16 h. As variáveis analisadas foram umidade ponderal, teor de açúcares solúveis, atividade respiratória, atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), ascorbato peroxidase (APX), guaiacol peroxidase (POD) e polifenoloxidase (PPO), teor de peróxido de hidrogênio (H2O2) e peroxidação lipídica. No final de março de 2015 as plantas já estavam dormentes, as folhas e frutos presentes indicam efeito de paradormência. A indução da endodormência pode ter ocorrido em junho de 2015, quando iniciou acúmulo de horas de frio (HF) abaixo de 7,2 °C e maiores HF abaixo de 12 °C, que coincidiu com o período que houve diminuição da umidade e da atividade respiratória, aumento dos açúcares redutores, diminuição da atividade da SOD, CAT, APX e PPO e aumento de H2O2. Após acúmulo de 553 HF abaixo de 12 °C, a capacidade de brotação aumentou e as gemas apresentaram aumento da umidade, diminuição do teor de açúcares redutores, aumento da atividade respiratória, baixa atividade da SOD, CAT, APX e POD e elevados teores de H2O2.

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The objective of this study was to evaluate the effective temperature for overcoming the dormancy of 'Fuyu' persimmon tree buds. Stem samples were collected three times between 2013 and 2014. Stems were maintained in a climate incubator chamber at 3, 6, 9, and 12 °C. For each temperature, five numbers of additional chilling hours (CH) (0, 240, 384, 528, and 672 CH) were studied. The experimental design was completely randomized in a 5 × 4 factorial design (chilling hours × temperatures) with four replications with 10 cuttings. The maintenance of branches at cold temperatures from 3 to 12 °C intensified endodormancy of the buds when the plants were at the beginning of endodormancy. The most effective temperatures for overcome dormancy when the buds were in transition from paradormancy to endodormancy were from 3 to 6 °C. When the buds were already in endodormancy, temperatures of 3, 6, 9, and 12 °C were effective for the accumulation of cold and overcoming dormancy. The increase in the number of chilling hours from 3 to 12 °C induced budburst and the temperature of 12 °C was able to slowly induce and overcome bud dormancy.

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ABSTRACT: This study identified physiological and biochemical changes in 'Fuyu' persimmon buds during dormancy. Branches were collected between March and August 2015. Dormancy was evaluated by biological testing of isolated node cuttings at 25 °C and a photoperiod of 16 h. The variables analyzed were water content; reducing sugar content; respiratory activity; activity of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), ascorbate peroxidase (APX), guaiacol peroxidase (POD) and polyphenol oxidase (PPO) enzymes; hydrogen peroxide content (H2O2) and lipid peroxidation. At the end of March 2015, the plants were already dormant, and the leaves and fruits present indicated a paradormancy effect. Induction of endodormancy may have occurred in June 2015, when chilling hours (CH) below 7.2 °C and higher CH below 12 °C began to accumulate, which coincided with the period in which there was a decrease in water content and respiratory activity, an increase in reducing sugars, a decrease in SOD, CAT, APX and PPO and an increase in H2O2. After an accumulation of 553 CH below 12 °C, the budburst capacity increased, and the buds presented increased water content, decreased reducing sugars content, increased respiratory activity, low activity in SOD, CAT, APX and POD and high levels of H2O2.

RESUMO: O objetivo deste trabalho foi identificar alterações fisiológicas e bioquímicas em gemas de caquizeiro 'Fuyu' durante a dormência. Ramos foram coletados entre março e agosto de 2015. A dormência foi avaliada pelo teste biológico de estacas de nós isolados, a 25 °C e fotoperíodo de 16 h. As variáveis analisadas foram umidade ponderal, teor de açúcares solúveis, atividade respiratória, atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), ascorbato peroxidase (APX), guaiacol peroxidase (POD) e polifenoloxidase (PPO), teor de peróxido de hidrogênio (H2O2) e peroxidação lipídica. No final de março de 2015 as plantas já estavam dormentes, as folhas e frutos presentes indicam efeito de paradormência. A indução da endodormência pode ter ocorrido em junho de 2015, quando iniciou acúmulo de horas de frio (HF) abaixo de 7,2 °C e maiores HF abaixo de 12 °C, que coincidiu com o período que houve diminuição da umidade e da atividade respiratória, aumento dos açúcares redutores, diminuição da atividade da SOD, CAT, APX e PPO e aumento de H2O2. Após acúmulo de 553 HF abaixo de 12 °C, a capacidade de brotação aumentou e as gemas apresentaram aumento da umidade, diminuição do teor de açúcares redutores, aumento da atividade respiratória, baixa atividade da SOD, CAT, APX e POD e elevados teores de H2O2.

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Abstract Diospyros kaki L. or Costata cultivar is the main persimmon variety progressively consumed in the Egyptian market and exportation. The objective of this study was to investigate the bioprotective effects of the alcoholic extract of fruits as well as leaves of D. kaki using in-vivo rat models. Petroleum ether extracts of fruits and leaves were analytically characterized for saponifiable and unsaponifiable compounds by GC/MS. Main flavonoids were chromatographically isolated from 80% aqueous methanol extract of leaves. Chemical evaluation for fruits and leaves namely, content of moisture, ash, proteins, fatty acids, amino acids, fat and water soluble vitamins, minerals, carotenoids was carried out. Total antioxidant activity was determined by radical scavenging effects using DPPH assay. The effect on biochemical parameters and its biological activity were also performed. Results revealed the identification of the major compounds of saponifiable and unsaponifiable matters of fruits and leaves. Scopoletin, as well as, kaempferol, luteolin, rutin and apigenin 7-O-glucoside were isolated and identified. It showed that this plant can provide a good nutritional value and it is safe regarding the kidney and liver functions, good source that help in enhancing the antioxidant defense against free radicals. No abnormal effects were found in lipids profile on experimental animals and there were good results in the ratio of HDL and LDL cholesterol. Also, this plant can help in optimizing blood sugar, enhancing the level of blood haemoglobin. It is concluded that D. kaki displays a good source of nutrients and bioactive compounds that may contribute to its therapeutic benefits against the risk of disease complications.

Resumo Diospyros kaki L. ou Costata é a principal variedade de caqui progressivamente consumida no mercado e exportação egípcia. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos bioprotetores do extrato alcoólico de frutos e folhas de D. kaki utilizando modelos de ratos "in vivo". Extratos de éter de petróleo provenientes de frutos e folhas foram caracterizados analiticamente para compostos saponificáveis ​​e insaponificáveis ​​por GC/MS. Os principais flavonoides foram isolados cromatograficamente, a partir de 80% de extrato aquoso de folhas de metanol. Foi realizada avaliação química de frutos e folhas, ou seja, de teor de umidade, cinzas, proteínas, ácidos graxos, aminoácidos, vitaminas lipossolúveis e solúveis em água, minerais, carotenoides. Foi caracterizada a atividade antioxidante, utilizando ensaio (DPPH). O efeito nos parâmetros bioquímicos e sua atividade biológica também foram analisados. Os resultados revelaram a identificação dos principais compostos saponificáveis e insaponificáveis de frutos e folhas. Escopoletina, bem como kaempferol, luteolina, rutina e apigenina 7-O-glicosídeo foram isolados e identificados. Também demonstraram que esta planta pode proporcionar um bom valor nutricional e é segura em relação às funções renais e hepáticas, boa fonte que ajuda a melhorar a defesa antioxidante contra os radicais livres. Não foram encontrados efeitos anormais no perfil lipídico em testes em animais, e houve um efeito satisfatório na relação de colesterol HDL e LDL. Além disso, esta planta pode ajudar na otimização do açúcar no sangue, aumentando o nível de hemoglobina. Conclui-se que o D. kaki apresenta uma boa fonte de nutrientes e de compostos bioativos que contribuem para seus benefícios terapêuticos e contra o risco de complicações de doenças.

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Diospyros kaki L. or Costata cultivar is the main persimmon variety progressively consumed in the Egyptian market and exportation. The objective of this study was to investigate the bioprotective effects of the alcoholic extract of fruits as well as leaves of D. kaki using in-vivo rat models. Petroleum ether extracts of fruits and leaves were analytically characterized for saponifiable and unsaponifiable compounds by GC/MS. Main flavonoids were chromatographically isolated from 80% aqueous methanol extract of leaves. Chemical evaluation for fruits and leaves namely, content of moisture, ash, proteins, fatty acids, amino acids, fat and water soluble vitamins, minerals, carotenoids was carried out. Total antioxidant activity was determined by radical scavenging effects using DPPH assay. The effect on biochemical parameters and its biological activity were also performed. Results revealed the identification of the major compounds of saponifiable and unsaponifiable matters of fruits and leaves. Scopoletin, as well as, kaempferol, luteolin, rutin and apigenin 7-O-glucoside were isolated and identified. It showed that this plant can provide a good nutritional value and it is safe regarding the kidney and liver functions, good source that help in enhancing the antioxidant defense against free radicals. No abnormal effects were found in lipids profile on experimental animals and there were good results in the ratio of HDL and LDL cholesterol. Also, this plant can help in optimizing blood sugar, enhancing the level of blood haemoglobin. It is concluded that D. kaki displays a good source of nutrients and bioactive compounds that may contribute to its therapeutic benefits against the risk of disease complications.(AU)

Diospyros kaki L. ou Costata é a principal variedade de caqui progressivamente consumida no mercado e exportação egípcia. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos bioprotetores do extrato alcoólico de frutos e folhas de D. kaki utilizando modelos de ratos in vivo. Extratos de éter de petróleo provenientes de frutos e folhas foram caracterizados analiticamente para compostos saponificáveis e insaponificáveis por GC/MS. Os principais flavonoides foram isolados cromatograficamente, a partir de 80% de extrato aquoso de folhas de metanol. Foi realizada avaliação química de frutos e folhas, ou seja, de teor de umidade, cinzas, proteínas, ácidos graxos, aminoácidos, vitaminas lipossolúveis e solúveis em água, minerais, carotenoides. Foi caracterizada a atividade antioxidante, utilizando ensaio (DPPH). O efeito nos parâmetros bioquímicos e sua atividade biológica também foram analisados. Os resultados revelaram a identificação dos principais compostos saponificáveis e insaponificáveis de frutos e folhas. Escopoletina, bem como kaempferol, luteolina, rutina e apigenina 7-O-glicosídeo foram isolados e identificados. Também demonstraram que esta planta pode proporcionar um bom valor nutricional e é segura em relação às funções renais e hepáticas, boa fonte que ajuda a melhorar a defesa antioxidante contra os radicais livres. Não foram encontrados efeitos anormais no perfil lipídico em testes em animais, e houve um efeito satisfatório na relação de colesterol HDL e LDL. Além disso, esta planta pode ajudar na otimização do açúcar no sangue, aumentando o nível de hemoglobina. Conclui-se que o D. kaki apresenta uma boa fonte de nutrientes e de compostos bioativos que contribuem para seus benefícios terapêuticos e contra o risco de complicações de doenças.(AU)

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The persimmon tree is known for its rusticity and productivity and was first introduced to Brazil in the late 19th century. However, anthracnose disease is causing immature fruit drop and severe disease symptoms in persimmon fruit, shoots, flowers, and twigs. The causal agent was first described as the fungal species, Colletotrichum horii, which was first confirmed using only the ITS region. In this study, we compared the aggressiveness of 13 isolates of Colletotrichum spp. obtained from fruit and shoots of persimmon grown in the Metropolitan Region of Curitiba, Paraná State, Brazil. A multilocus molecular analysis was carried out based on ITS, GPDH, and EF genes, and we confirmed that the isolates were confirmed as C. horii. All isolates were pathogenic for unwounded and wounded persimmon fruit but differed in aggressiveness. Only one isolate was non-pathogenic when inoculated into unwounded persimmon shoots. Most isolates caused cankers and shoot death whether shoots were wounded or unwounded. In this study, we emphasized the importance of shoots as a source of primary inoculum. In future studies, it will be critical to further elucidate the epidemiological basis of anthracnose disease by conducting field studies to establish a more effective strategy for disease control.(AU)

O caquizeiro foi introduzido no Brasil no final do século XIX. Esta planta é conhecida por sua rusticidade e produtividade. No entanto, a doença antracnose está causando queda e sintomas em frutos imaturos, ramos, flores e galhos no campo. O agente causal foi descrito inicialmente como Colletotrichum hori (confirmado usando apenas a região ITS) causando cancro de galho e sintomas de folhas. Neste estudo, comparamos a agressividade em caqui utilizando uma coleção de 13 isolados de Colletotrichum spp. obtidos de frutos e ramos de caqui da região metropolitana de Curitiba, Paraná, Brasil. Uma análise molecular multilocus foi realizada com base nos genes ITS, GPDH e EF, e os isolados foram confirmados como pertencentes a C. horii. Todos os isolados foram patogênicos em frutos não feridos e feridos, mas diferiram na agressividade. Apenas um isolado não foi patogênico quando inoculado sem ferimento em ramos. A maioria dos isolados foi capaz de causar cancro e morte de ramo, independentemente do ferimento. Neste estudo, enfatizamos a importância das novas brotações como fonte de inóculo primário. Para um próximo estudo, ainda é necessário ampliar as bases epidemiológicas com estudos em campo para estabelecer uma correta estratégia de controle desta doença.(AU)

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ABSTRACT: The persimmon tree is known for its rusticity and productivity and was first introduced to Brazil in the late 19th century. However, anthracnose disease is causing immature fruit drop and severe disease symptoms in persimmon fruit, shoots, flowers, and twigs. The causal agent was first described as the fungal species, Colletotrichum horii, which was first confirmed using only the ITS region. In this study, we compared the aggressiveness of 13 isolates of Colletotrichum spp. obtained from fruit and shoots of persimmon grown in the Metropolitan Region of Curitiba, Paraná State, Brazil. A multilocus molecular analysis was carried out based on ITS, GPDH, and EF genes, and we confirmed that the isolates were confirmed as C. horii. All isolates were pathogenic for unwounded and wounded persimmon fruit but differed in aggressiveness. Only one isolate was non-pathogenic when inoculated into unwounded persimmon shoots. Most isolates caused cankers and shoot death whether shoots were wounded or unwounded. In this study, we emphasized the importance of shoots as a source of primary inoculum. In future studies, it will be critical to further elucidate the epidemiological basis of anthracnose disease by conducting field studies to establish a more effective strategy for disease control.

RESUMO: O caquizeiro foi introduzido no Brasil no final do século XIX. Esta planta é conhecida por sua rusticidade e produtividade. No entanto, a doença antracnose está causando queda e sintomas em frutos imaturos, ramos, flores e galhos no campo. O agente causal foi descrito inicialmente como Colletotrichum hori (confirmado usando apenas a região ITS) causando cancro de galho e sintomas de folhas. Neste estudo, comparamos a agressividade em caqui utilizando uma coleção de 13 isolados de Colletotrichum spp. obtidos de frutos e ramos de caqui da região metropolitana de Curitiba, Paraná, Brasil. Uma análise molecular multilocus foi realizada com base nos genes ITS, GPDH e EF, e os isolados foram confirmados como pertencentes a C. horii. Todos os isolados foram patogênicos em frutos não feridos e feridos, mas diferiram na agressividade. Apenas um isolado não foi patogênico quando inoculado sem ferimento em ramos. A maioria dos isolados foi capaz de causar cancro e morte de ramo, independentemente do ferimento. Neste estudo, enfatizamos a importância das novas brotações como fonte de inóculo primário. Para um próximo estudo, ainda é necessário ampliar as bases epidemiológicas com estudos em campo para estabelecer uma correta estratégia de controle desta doença.