RESUMO
This study investigated in vitro the efficacy of four different extenders (TES-TRIS and TRIS with LDL low-density lipoprotein at concentrations of 10 or 5%) on the longevity of buffalo sperm in the refrigeration process at 5ºC. Sperm motility was assessed every 24 hours up to 72 hours of incubation using computer assisted sperm analysis and sperm membrane integrity was examined by the hypoosmotic test (HOST) at T1, T24, T48 and T72 hours. Eleven buffaloes (1 ejaculate per buffalo) of the Murrah breed were used, ranging in age from 4 to 5 years. Immediately after collection, each ejaculate was fractionated into 4 aliquots, and each aliquot was diluted in one of four diluents to obtain 50x106SPTZ/mL. The samples were packed in 0.5mL straws and refrigerated (-0.25°C/min) to 5°C and maintained at this temperature until evaluation. Prior to evaluation the samples were heated at 37°C for 30 seconds. The statistical package used for analysis was STATA 12.0 "Statistical Analysis Software" and means were compared by the Friedman test (P<0.05). The results of sperm kinetics and HOST indicate that the TRIS diluent with 10% LDL could be a promising alternative for semen refrigeration at 5ºC, to be used in conventional and fixed time artificial insemination.(AU)
Este estudo investigou in vitro a eficácia de quatro diferentes extensores (TES-TRIS e TRIS com lipoproteína de baixa densidade - LDL, nas concentrações de 10 ou 5%) sobre a longevidade espermática de búfalos no processo de refrigeração a 5ºC. A motilidade espermática foi avaliada a cada 24 horas até 72 horas de incubação, por sistema computadorizado "CASA", e a integridade de membrana espermática foi examinada pelo teste hiposmótico (HOST) em T1, T24, T48 e T72 horas. Foram utilizados 11 búfalos (um ejaculado por búfalo) da raça Murrah, com idade variando de quatro a cinco anos. Imediatamente após a coleta, cada ejaculado foi fracionado em quatro alíquotas, e cada alíquota foi diluída em um dos quatro diluidores para a obtenção de 50x106 SPTZ/mL. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL, refrigeradas (-0,25oC/minuto) até 5oC e mantidas nessa temperatura até a avaliação. Previamente à avaliação, as amostras foram aquecidas a 37oC por 30 segundos. O pacote estatístico utilizado para as análises foi o STATA 12.0 "Statistical Analysis Software", e as médias foram comparadas pelo teste de Friedman (P<0,05). Os resultados de cinética e HOST até o tempo de 48 horas indicam que o diluidor TRIS com 10% LDL seria uma alternativa promissora para a refrigeração do sêmen a 5ºC, a ser utilizado na inseminação artificial e na inseminação artificial em tempo fixo.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Preservação do Sêmen/veterinária , Motilidade dos Espermatozoides , Búfalos , Lipoproteínas LDL , Técnicas In Vitro , Inseminação Artificial , Técnicas de Diluição do Indicador/veterináriaRESUMO
This study investigated in vitro the efficacy of four different extenders (TES-TRIS and TRIS with LDL low-density lipoprotein at concentrations of 10 or 5%) on the longevity of buffalo sperm in the refrigeration process at 5ºC. Sperm motility was assessed every 24 hours up to 72 hours of incubation using computer assisted sperm analysis and sperm membrane integrity was examined by the hypoosmotic test (HOST) at T1, T24, T48 and T72 hours. Eleven buffaloes (1 ejaculate per buffalo) of the Murrah breed were used, ranging in age from 4 to 5 years. Immediately after collection, each ejaculate was fractionated into 4 aliquots, and each aliquot was diluted in one of four diluents to obtain 50x106SPTZ/mL. The samples were packed in 0.5mL straws and refrigerated (-0.25°C/min) to 5°C and maintained at this temperature until evaluation. Prior to evaluation the samples were heated at 37°C for 30 seconds. The statistical package used for analysis was STATA 12.0 "Statistical Analysis Software" and means were compared by the Friedman test (P<0.05). The results of sperm kinetics and HOST indicate that the TRIS diluent with 10% LDL could be a promising alternative for semen refrigeration at 5ºC, to be used in conventional and fixed time artificial insemination.(AU)
Este estudo investigou in vitro a eficácia de quatro diferentes extensores (TES-TRIS e TRIS com lipoproteína de baixa densidade - LDL, nas concentrações de 10 ou 5%) sobre a longevidade espermática de búfalos no processo de refrigeração a 5ºC. A motilidade espermática foi avaliada a cada 24 horas até 72 horas de incubação, por sistema computadorizado "CASA", e a integridade de membrana espermática foi examinada pelo teste hiposmótico (HOST) em T1, T24, T48 e T72 horas. Foram utilizados 11 búfalos (um ejaculado por búfalo) da raça Murrah, com idade variando de quatro a cinco anos. Imediatamente após a coleta, cada ejaculado foi fracionado em quatro alíquotas, e cada alíquota foi diluída em um dos quatro diluidores para a obtenção de 50x106 SPTZ/mL. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL, refrigeradas (-0,25oC/minuto) até 5oC e mantidas nessa temperatura até a avaliação. Previamente à avaliação, as amostras foram aquecidas a 37oC por 30 segundos. O pacote estatístico utilizado para as análises foi o STATA 12.0 "Statistical Analysis Software", e as médias foram comparadas pelo teste de Friedman (P<0,05). Os resultados de cinética e HOST até o tempo de 48 horas indicam que o diluidor TRIS com 10% LDL seria uma alternativa promissora para a refrigeração do sêmen a 5ºC, a ser utilizado na inseminação artificial e na inseminação artificial em tempo fixo.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Preservação do Sêmen/veterinária , Motilidade dos Espermatozoides , Búfalos , Lipoproteínas LDL , Técnicas In Vitro , Inseminação Artificial , Técnicas de Diluição do Indicador/veterináriaRESUMO
Queixada (Tayassu pecari) é um mamífero neotropical, classificado como vulnerável devido à caça e à destruição de seu habitat. Em razão das dificuldades na reprodução em cativeiro, técnicas de reprodução assistida podem ser aplicadas em programas de repovoamento da espécie. Dessa forma, objetivou-se identificar o melhor protocolo de teste hiposmótico (HOST) para avaliar a integridade funcional dos espermatozoides de queixada. O sêmen de quatro machos adultos foi coletado com auxílio de eletroejaculador após contenção física e protocolo de sedação e anestesia. O sêmen foi avaliado quanto às características macro e microscópicas e diluído nas seguintes soluções hiposmóticas: água destilada (0mOsmol/L), sacarose (50, 100, 150mOsm/L) e frutose (50, 100, 150mOsm/L). Cada amostra foi incubada em duplicata, e uma sofreu fixação em solução de citrato de sódio formolizado a 4%. Duzentos espermatozoides foram avaliados por amostra e classificados em reativos ou não ao HOST. Todas as soluções testadas foram semelhantes em identificar o percentual de espermatozoides reativos, independentemente de a amostra ser ou não fixada (P>0,05). Dessa forma, pode-se usar água destilada como HOST por este apresentar resultados similares e por ser um teste mais barato.(AU)
White-lipped peccary (Tayassu pecari) is a neotropical mammal classified as vulnerable due to overhunting and habitat destruction. Due to the low reproduction success in captivity, assisted reproduction techniques can be used in re-stocking programs. Therefore, we aimed to identify the best hyposmotic swelling test (HOST) to evaluate the functional integrity of peccary sperm. Semen samples of four adult males were collected with the aid of an electroejaculator after physical contention, sedation and anesthesia protocols. The semen was evaluated for macro and microscopic characteristics and diluted in the following hyposmotic solutions: distilled water (0mOsmol/L), sucrose (50, 100, 150mOsm/L) and fructose (50, 100, 150mOsm/L). Each sample was incubated in duplicate and one was fixed in 4% formalized sodium citrate solution. Two hundred spermatozoa were evaluated from each sample and classified as reactive or not- reactive to HOST. There were similar proportions of reactive and functional sperm regardless of whether the sample was fixed or not fixed (P> 0.05). Therefore, distilled water can be used as HOST to evaluate the functional integrity of white-lipped peccary sperm because it shows similar results and it is a cheaper test.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Concentração Osmolar , Artiodáctilos , Análise do Sêmen/métodos , Análise do Sêmen/veterinária , Água DestiladaRESUMO
Queixada (Tayassu pecari) é um mamífero neotropical, classificado como vulnerável devido à caça e à destruição de seu habitat. Em razão das dificuldades na reprodução em cativeiro, técnicas de reprodução assistida podem ser aplicadas em programas de repovoamento da espécie. Dessa forma, objetivou-se identificar o melhor protocolo de teste hiposmótico (HOST) para avaliar a integridade funcional dos espermatozoides de queixada. O sêmen de quatro machos adultos foi coletado com auxílio de eletroejaculador após contenção física e protocolo de sedação e anestesia. O sêmen foi avaliado quanto às características macro e microscópicas e diluído nas seguintes soluções hiposmóticas: água destilada (0mOsmol/L), sacarose (50, 100, 150mOsm/L) e frutose (50, 100, 150mOsm/L). Cada amostra foi incubada em duplicata, e uma sofreu fixação em solução de citrato de sódio formolizado a 4%. Duzentos espermatozoides foram avaliados por amostra e classificados em reativos ou não ao HOST. Todas as soluções testadas foram semelhantes em identificar o percentual de espermatozoides reativos, independentemente de a amostra ser ou não fixada (P>0,05). Dessa forma, pode-se usar água destilada como HOST por este apresentar resultados similares e por ser um teste mais barato.(AU)
White-lipped peccary (Tayassu pecari) is a neotropical mammal classified as vulnerable due to overhunting and habitat destruction. Due to the low reproduction success in captivity, assisted reproduction techniques can be used in re-stocking programs. Therefore, we aimed to identify the best hyposmotic swelling test (HOST) to evaluate the functional integrity of peccary sperm. Semen samples of four adult males were collected with the aid of an electroejaculator after physical contention, sedation and anesthesia protocols. The semen was evaluated for macro and microscopic characteristics and diluted in the following hyposmotic solutions: distilled water (0mOsmol/L), sucrose (50, 100, 150mOsm/L) and fructose (50, 100, 150mOsm/L). Each sample was incubated in duplicate and one was fixed in 4% formalized sodium citrate solution. Two hundred spermatozoa were evaluated from each sample and classified as reactive or not- reactive to HOST. There were similar proportions of reactive and functional sperm regardless of whether the sample was fixed or not fixed (P> 0.05). Therefore, distilled water can be used as HOST to evaluate the functional integrity of white-lipped peccary sperm because it shows similar results and it is a cheaper test.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Concentração Osmolar , Artiodáctilos , Análise do Sêmen/métodos , Análise do Sêmen/veterinária , Água DestiladaRESUMO
This study aims to evaluate the effects of tea of copaíba extract (Copaifera luetzelburgii), in differentconcentrations, added to the Tris-egg yolk extender, the functionality of the plasma membrane sperm ofcryopreserved goats. Were used four goats breeds, adults, male, six of each breed, aged between 1 and 6 years,a pool of ejaculates were formed to analyze. The animals were randomly divided into four experimentaltreatments: TI without adding of tea of copaíba extract (control); TII, added 0,1 mg of tea of copaíba extract;TIII, 0,2 mg; and TIV, 0,5 mg. The samples were frozen and stored, after 30 days were thawed for analysis byhisposmotic test (HOST). Adding tea of copaíba extract showed no significant difference between treatments forHOST, so the use of tea of copaíba extract the seminal dilution was not effective in preserving the functionalityplasma membrane sperm of goats post-thawing.
Assuntos
Masculino , Animais , Fabaceae/fisiologia , Fabaceae/química , Membrana Celular/classificação , Membrana Celular/química , Ruminantes/embriologia , Ruminantes/fisiologia , Criopreservação/métodos , Criopreservação/veterináriaRESUMO
To evaluate testicular tissue before cryopreservation is important to quantify and qualify losses ofsperm during the freezing/thawing of testicular tissue. The aim of this study was to analyze the sperm plasmamembrane structural and functional integrity on post-pubertal dogs (n = 7) fresh testis. The sperm fromtesticular tissue were submitted to plasma membrane structural and functional integrity analysis by fluorescentmicroscopy using SYBR 14 and Propidium Iodide and the hiposmotic test, respectively. For statistical analysis,it was used normality test (Shapiro Wilk) and Wilcoxon test (R 3.3.1; P > 0.05). It was observed 94.9% and91.8% spermatozoa presenting structural and functional integrity, respectively. Thus, analysis of the membraneintegrity is an important tool to analyze spermatozoa extracted from testicles. Despite the fluorescence be apractical method, it has a high cost.
Assuntos
Animais , Cães , Corantes Fluorescentes/análise , Corantes Fluorescentes/química , Cães/embriologia , Espermatozoides/citologia , TestículoRESUMO
To evaluate testicular tissue before cryopreservation is important to quantify and qualify losses ofsperm during the freezing/thawing of testicular tissue. The aim of this study was to analyze the sperm plasmamembrane structural and functional integrity on post-pubertal dogs (n = 7) fresh testis. The sperm fromtesticular tissue were submitted to plasma membrane structural and functional integrity analysis by fluorescentmicroscopy using SYBR 14 and Propidium Iodide and the hiposmotic test, respectively. For statistical analysis,it was used normality test (Shapiro Wilk) and Wilcoxon test (R 3.3.1; P > 0.05). It was observed 94.9% and91.8% spermatozoa presenting structural and functional integrity, respectively. Thus, analysis of the membraneintegrity is an important tool to analyze spermatozoa extracted from testicles. Despite the fluorescence be apractical method, it has a high cost.(AU)
Assuntos
Animais , Cães , Cães/embriologia , Espermatozoides/citologia , Corantes Fluorescentes/análise , Corantes Fluorescentes/química , TestículoRESUMO
This study aims to evaluate the effects of tea of copaíba extract (Copaifera luetzelburgii), in differentconcentrations, added to the Tris-egg yolk extender, the functionality of the plasma membrane sperm ofcryopreserved goats. Were used four goats breeds, adults, male, six of each breed, aged between 1 and 6 years,a pool of ejaculates were formed to analyze. The animals were randomly divided into four experimentaltreatments: TI without adding of tea of copaíba extract (control); TII, added 0,1 mg of tea of copaíba extract;TIII, 0,2 mg; and TIV, 0,5 mg. The samples were frozen and stored, after 30 days were thawed for analysis byhisposmotic test (HOST). Adding tea of copaíba extract showed no significant difference between treatments forHOST, so the use of tea of copaíba extract the seminal dilution was not effective in preserving the functionalityplasma membrane sperm of goats post-thawing.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Ruminantes/embriologia , Ruminantes/fisiologia , Fabaceae/química , Fabaceae/fisiologia , Membrana Celular/química , Membrana Celular/classificação , Criopreservação/métodos , Criopreservação/veterináriaRESUMO
Este estudo descreveu as características seminais, da membrana plasmática e do acrossoma de espermatozoide congelado/descongelado de 19 ejaculados de garanhões da raça Nordestina. Os aspectos analisados incluíram os parâmetros físicos do sêmen fresco; a motilidade e a longevidade do sêmen diluído e descongelado; a morfologia espermática, integridade funcional e estrutural da membrana plasmática do espermatozoide e a habilidade de ligação do espermatozoide à membrana perivitelina da gema do ovo de galinha do sêmen descongelado. As variáveis foram avaliadas pela ANOVA com post hoc teste de Student Newman-Keuls (P<0,05). A MT e a MP foram maiores (P<0,05) no sêmen diluído do que no descongelado. A percentagem média de defeitos maiores, menores e totais foi muito inferior ao limite recomendado pelo CBRA. A porcentagem de reativos ao HOST foi de 14,21±1,12% e a porcentagem média de membranas íntegras detectadas pelo teste supravital de 62,22±9,06% e pela sonda SYBR-14 de 81,47±26,90. O número médio de espermatozoides ligados à MPV após a descongelação do sêmen foi de 230,39±57,09. A MT e MP no tempo 0 min do TTR foi superior (P<0,05) em relação a 150 min, não diferindo nos tempos 10 min e 30 min. Os resultados demonstram que a utilização dos testes laboratoriais adicionais ajudam no processo de avaliação das amostras, possibilitando a obtenção de informações mais confiáveis e precisas. Embora a criopreservação tenha provocado queda na motilidade seminal, o uso de diluidor contendo amidas minimizou os danos osmóticos nas células espermáticas e manteve a integridade morfológica, funcional e estrutural da membrana plasmática do espermatozoide. Estes resultados são um referencial em estudos futuros uma vez que, inexistem dados comparativos nesta raça.(AU)
This paper describes the seminal characteristics of the plasma membrane of frozen-thawed sperm. Nineteen ejaculates of Nordestino horse breed. The aspects analyzed in the physical parameters of fresh semen were total and progressive motility and your longevity after dilution or thawed; sperm morphology, functional and structural integrity of the plasma membrane of the sperm and the sperm-binding ability to the perivitelline membrane of the yolk (MPV) after thawed. The variables were assessed by ANOVA with post hoc test of Student Newman-Keuls test (P<0.05). The total and progressive motility were higher in diluted semen than thawed (P<0.05). The average percentage of the major, minor and total defects was lower than the limit recommended by the CBRA. The percentage of reactive to hypo-osmotic swelling test was 14.21±1.12%, the intact membrane detected by supravitally test was 62.22±9.06% and the SYBR-14 was 81.47±26.9. The ability of sperm to bind to the MPV after thawing semen was 230.39±57.09. The total and progressive motility at time 0 min of termo resistance test was higher than to 150 minutes (P<0.05), and no difference was observed in the times 10 and 30 minutes. The results demonstrate that the use of additional laboratory tests help in the process of evaluation of samples, making possible to obtain more reliable and accurate information. Although cryopreservation has caused decrease in sperm motility and was used diluents with amides to diluted and cryopreservation protocol and this minimized the osmotic damage to sperm cells and maintained the morphological, functional and structural integrity of the plasma membrane of the sperm. These results are a reference for future studies since there are no comparative data on this breed.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Cavalos/fisiologia , Espermatozoides/fisiologia , Análise do Sêmen/veterinária , Motilidade dos Espermatozoides/fisiologia , Preservação do Sêmen/veterinária , Criopreservação/veterinária , Preservação do Sêmen/efeitos adversosRESUMO
Este estudo descreveu as características seminais, da membrana plasmática e do acrossoma de espermatozoide congelado/descongelado de 19 ejaculados de garanhões da raça Nordestina. Os aspectos analisados incluíram os parâmetros físicos do sêmen fresco; a motilidade e a longevidade do sêmen diluído e descongelado; a morfologia espermática, integridade funcional e estrutural da membrana plasmática do espermatozoide e a habilidade de ligação do espermatozoide à membrana perivitelina da gema do ovo de galinha do sêmen descongelado. As variáveis foram avaliadas pela ANOVA com post hoc teste de Student Newman-Keuls (P<0,05). A MT e a MP foram maiores (P<0,05) no sêmen diluído do que no descongelado. A percentagem média de defeitos maiores, menores e totais foi muito inferior ao limite recomendado pelo CBRA. A porcentagem de reativos ao HOST foi de 14,21±1,12% e a porcentagem média de membranas íntegras detectadas pelo teste supravital de 62,22±9,06% e pela sonda SYBR-14 de 81,47±26,90. O número médio de espermatozoides ligados à MPV após a descongelação do sêmen foi de 230,39±57,09. A MT e MP no tempo 0 min do TTR foi superior (P<0,05) em relação a 150 min, não diferindo nos tempos 10 min e 30 min. Os resultados demonstram que a utilização dos testes laboratoriais adicionais ajudam no processo de avaliação das amostras, possibilitando a obtenção de informações mais confiáveis e precisas. Embora a criopreservação tenha provocado queda na motilidade seminal, o uso de diluidor contendo amidas minimizou os danos osmóticos nas células espermáticas e manteve a integridade morfológica, funcional e estrutural da membrana plasmática do espermatozoide. Estes resultados são um referencial em estudos futuros uma vez que, inexistem dados comparativos nesta raça...
This paper describes the seminal characteristics of the plasma membrane of frozen-thawed sperm. Nineteen ejaculates of Nordestino horse breed. The aspects analyzed in the physical parameters of fresh semen were total and progressive motility and your longevity after dilution or thawed; sperm morphology, functional and structural integrity of the plasma membrane of the sperm and the sperm-binding ability to the perivitelline membrane of the yolk (MPV) after thawed. The variables were assessed by ANOVA with post hoc test of Student Newman-Keuls test (P<0.05). The total and progressive motility were higher in diluted semen than thawed (P<0.05). The average percentage of the major, minor and total defects was lower than the limit recommended by the CBRA. The percentage of reactive to hypo-osmotic swelling test was 14.21±1.12%, the intact membrane detected by supravitally test was 62.22±9.06% and the SYBR-14 was 81.47±26.9. The ability of sperm to bind to the MPV after thawing semen was 230.39±57.09. The total and progressive motility at time 0 min of termo resistance test was higher than to 150 minutes (P<0.05), and no difference was observed in the times 10 and 30 minutes. The results demonstrate that the use of additional laboratory tests help in the process of evaluation of samples, making possible to obtain more reliable and accurate information. Although cryopreservation has caused decrease in sperm motility and was used diluents with amides to diluted and cryopreservation protocol and this minimized the osmotic damage to sperm cells and maintained the morphological, functional and structural integrity of the plasma membrane of the sperm. These results are a reference for future studies since there are no comparative data on this breed...