RESUMO
Abstract Background: Oocyte quality and maturation are influenced by protein supplementation. Objective: To evaluate the influence of fetal bovine serum (FBS) and bovine serum albumin (BSA) concentrations on the recovery and in vitro maturation (IVM) of bovine oocytes. Methods: The study was divided into Stage 1 (oocyte recovery), and Stage 2 (IVM). In the first stage, three experiments were conducted according to the recovery (R) medium used: (R1) 10 vs. 20% FBS; (R2) 5 vs. 10% BSA; and (R3) the best results from R1, R2, and the combination of FBS+BSA (5+5%). Within the second stage, the maturation medium was supplemented according to three experiments: (M1) 5 vs. 10% FBS; (M2) 0.4 vs. 0.8% BSA; and (M3) better results of M1, M2, and the combination of FBS+BSA (5+0.8%). Results: In Stage 1 (R1 and R2), the media with 10% FBS and 10% BSA showed better oocyte quality results and were defined for experiment R3. In R3, the 10% FBS and the combination of FBS+BSA (5+5%) allowed recovery of better-quality oocytes. In Stage 2 (M1 and M2), media with both levels of FBS (5 and 10%) and 0.8% BSA were defined as better according to the maturation and viability rates of cumulus cells, so they were defined for experiment M3. In M3, no difference was noted among the supplements. Conclusions: For oocyte recovery, 10% FBS and the combination of FBS+BSA (5+5%) can be used to obtain immature oocytes. For the in vitro maturation, FBS (both levels, 5 and 10%) and BSA (0.8%) can be used alone or in combination.
Resumen Antecedentes: La calidad y maduración de los ovocitos son influenciados por la suplementación proteica. Objetivo: Evaluar la influencia de concentraciones de suero fetal bovino (FBS) y albúmina sérica bovina (BSA) en la recuperación y maduración in vitro (IVM) de ovocitos bovinos. Métodos: El estudio se dividió en Etapa 1 (recuperación de ovocitos) y Etapa 2 (IVM). En la primera etapa, tres experimentos se realizaron de acuerdo con el medio de recuperación: (R1) 10 vs. 20% FBS; (R2) 5 vs. 10% BSA; y (R3) los mejores resultados de R1, R2 y la combinación de FBS+BSA (5+5%). En la segunda etapa, el medio de maduración fue suplementado para tres experimentos: (M1) 5 vs. 10% FBS; (M2) 0,4 vs. 0,8% BSA; y (M3) mejores resultados de M1, M2 y la combinación de FBS+BSA (5+0,8%). Resultados: En la Etapa 1 (R1 y R2), los medios con 10% FBS y 10% BSA mostraron mejores resultados de calidad oocitaria y fueron definidos para el experimento R3. En R3, 10% FBS y la combinación de FBS+BSA (5+5%) permitieron la recuperación de ovocitos de mejor calidad. En la Etapa 2 (M1 y M2), los medios con ambos niveles de FBS (5 y 10%) y 0,8% de BSA se definieron como mejores de acuerdo con las tasas de maduración y viabilidad de las células del cumulus, por lo que se definieron para el experimento M3. En M3, no se observó diferencia entre los suplementos. Conclusiones: Para la recuperación de ovocitos, se puede utilizar 10% de FBS y la combinación de FBS+BSA (5+5%) para obtener ovocitos inmaduros. Para la maduración in vitro, FBS (ambos niveles, 5 y 10%) y BSA (0,8%) se pueden usar solos o en combinación.
Resumo Antecedentes: A qualidade e a maturação de oócitos são influenciadas pela suplementação proteica. Objetivo: Avaliar a influência de concentrações de soro fetal bovino (FBS) e albumina sérica bovina (BSA) sobre a recuperação e maturação in vitro (IVM) de oócitos bovinos. Métodos: O estudo foi dividido em Etapa 1 (recuperação de oócitos) e Etapa 2 (IVM). Na primeira etapa, três experimentos foram realizados de acordo com o meio de recuperação: (R1) 10 vs. 20% FBS; (R2) 5 vs. 10% BSA; e (R3) melhores resultados de R1, R2 e a combinação de FBS+BSA (5+5%). Na segunda etapa, o meio de maturação foi suplementado de acordo com três experimentos: (M1) 5 vs. 10% FBS; (M2) 0,4 vs. 0,8% BSA; e (M3) melhores resultados de M1, M2 e a combinação de FBS+BSA (5+0,8%). Resultados: Na Etapa 1 (R1 e R2), os meios com 10% FBS e 10% BSA mostraram melhores resultados de qualidade oocitária e foram definidos para o experimento R3. Em R3, 10% FBS e a combinação de FBS+BSA (5+5%) permitiram a recuperação de oócitos de melhor qualidade. Na segunda etapa (M1 e M2), meios com ambos os níveis de FBS (5 e 10%) e 0,8% BSA foram definidos como os melhores de acordo com as taxas de maturação e viabilidade de células do cumulus, então foram definidos para o experimento M3. No M3, não houve diferença entre os suplementos. Conclusões: Para a recuperação oocitária, 10% FBS e a combinação de FBS+BSA (5+5%) podem ser usados para obter oócitos imaturos. Para maturação in vitro, FBS (ambos os níveis, 5 e 10%) e BSA (0,8%) podem ser usados sozinhos ou em combinação.
RESUMO
Os objetivos foram avaliar os parâmetros quanti-qualitativos de oócitos bovinos após recuperação usando diferentes métodos de colheita e tipos de êmbolo da seringa de aspiração. Assim, dois experimentos foram realizados usando ovários de fêmeas post-mortem. No primeiro experimento, duas técnicas de colheita oocitária foram empregadas: aspiração de folículos (28 mm) com agulha 21G e seringa de 5 mL e, fatiamento da superfície ovariana (slicing). No segundo experimento, folículos (28 mm) foram aspirados usando seringa com distintos êmbolos (borracha vs. plástico). Os complexos cumulus-oócito (CCOs) foram classificados por critérios morfológicos em viáveis e não viáveis. Em seguida, CCOs foram corados com o azul de cresil brilhante (ACB) (60 min; 26 μM) e classificados como ACB+ (viáveis) e ACB- (não viáveis). Um total de cinco repetições por experimento foi realizado e os dados analisados pelo teste exato de Fisher (P0,05) foi observada entre os tipos de êmbolos quanto aos parâmetros quantitativos. Quanto à qualidade oocitária avaliada por critérios morfológicos, um percentual maior de oócitos viáveis foi recuperado usando êmbolo de borracha (75,4% vs. 58,2%; P<0,05). Em conclusão, oócitos de melhor qualidade podem ser obtidos a partir da aspiração folicular, especialmente usando seringa com êmbolo de borracha.
The aims were to evaluate qualitative-quantitative parameters of bovine oocytes after recovery using different collectionmethods and piston type from the aspiration syringe. Thus, two experiments were performed using ovaries from postmortemfemales. In the first experiment, two techniques of oocyte recovery were used: aspiration of follicles (28 mm)with 21G needle and 5 mL syringe, and slicing of the ovarian surface. In the second experiment, follicles (28 mm)were aspirated using syringes with different pistons (rubber vs. plastic). The cumulus-oocyte complexes (COCs) wereclassified by morphological criteria as viable and non-viable. Then, COCs were stained with brilliant cresyl blue (BCB)(60 min, 26 µM) and categorized as BCB+(viable) and BCB-(non-viable). A total of five repetitions per experimentwas performed and the data analyzed by Fisher's exact test (P0.05) was observed the piston type as the quantitativeparameters. As the oocyte quality evaluated by morphological criteria, a higher percentage of viable oocytes wererecovered using rubber piston (75.4% vs. 58.2%; P<0.05). In conclusion, better quality oocytes can be obtained fromfollicular aspiration, especially by using a rubber piston syringe
Assuntos
Feminino , Animais , Bovinos , Oócitos , Recuperação de Oócitos/métodos , Recuperação de Oócitos/veterinária , Folículo OvarianoRESUMO
The objective of this study was to assess the reproductive response of adult and prepubertal goats subjected to repeated laparoscopic ovum pick-up (LOPU). The study animals were divided into two groups, specifically, adult nanny goats (GA, n=10) and prepubertal nanny goats (GP, n=10), which were subjected to estrous synchronization and ovarian stimulation for LOPU. Both groups underwent six LOPU procedures at seven-day intervals and were subsequently subjected to controlled mating and pregnancy diagnosis to evaluate their future fertility. The study showed a reduction in the number of follicles visualized and in the amount and quality of the oocytes that were recovered and exposed to in vitro maturation. As indicated by the fertility test, however, no complications were found during the laparoscopic procedures that would impair the reproductive future of the animals. Therefore, a viable number of oocytes were obtained even with the decreased reproductive efficiency, proving that repeated LOPUs do not interfere with the reproductive of adult and prepubertal nanny goats. These results indicate a positive aspect of this procedure, allowing for increasing reproductive performance of this kind, when used for the production in vitro.(AU)
O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta reprodutiva de cabras adultas e pré-púberes submetidas a repetidas aspirações foliculares por videolaparoscopia (LOPU). Os animais do estudo foram divididos em dois grupos, especificamente cabras adultas (GA, n = 10) e pré-púberes (GP, n = 10), que foram submetidas a sincronização de estro e estimulação ovariana para LOPU. Ambos os grupos foram submetidos a seis procedimentos LOPU em intervalos de sete dias e foram posteriormente submetidos à monta controlada e posterior diagnóstico de gestação para avaliar sua fertilidade. O estudo mostrou uma diminuição do número de folículos visualizados, na quantidade e na qualidade dos oócitos que foram recuperados e expostos à maturação in vitro. Tal como indicado pelo teste de fertilidade, no entanto, não foram observadas grandes complicações durante os procedimentos laparoscópicos que pudessem prejudicar o futuro reprodutivo dos animais. Portanto, foi obtido um número de oócitos viáveis, mesmo com a diminuição da eficiência reprodutiva, provando que repetidas LOPU não interferem na reprodutividade de animais adultos e pré-púberes. Estes resultados indicam um aspecto positivo desse procedimento, possibilitando um aumento da eficiência reprodutiva dessa espécie quando utilizado para a produção in vitro.(AU)
Assuntos
Animais , Laparoscopia , Oócitos , Cabras/classificaçãoRESUMO
The objective of this study was to assess the reproductive response of adult and prepubertal goats subjected to repeated laparoscopic ovum pick-up (LOPU). The study animals were divided into two groups, specifically, adult nanny goats (GA, n=10) and prepubertal nanny goats (GP, n=10), which were subjected to estrous synchronization and ovarian stimulation for LOPU. Both groups underwent six LOPU procedures at seven-day intervals and were subsequently subjected to controlled mating and pregnancy diagnosis to evaluate their future fertility. The study showed a reduction in the number of follicles visualized and in the amount and quality of the oocytes that were recovered and exposed to in vitro maturation. As indicated by the fertility test, however, no complications were found during the laparoscopic procedures that would impair the reproductive future of the animals. Therefore, a viable number of oocytes were obtained even with the decreased reproductive efficiency, proving that repeated LOPUs do not interfere with the reproductive of adult and prepubertal nanny goats. These results indicate a positive aspect of this procedure, allowing for increasing reproductive performance of this kind, when used for the production in vitro.
O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta reprodutiva de cabras adultas e pré-púberes submetidas a repetidas aspirações foliculares por videolaparoscopia (LOPU). Os animais do estudo foram divididos em dois grupos, especificamente cabras adultas (GA, n = 10) e pré-púberes (GP, n = 10), que foram submetidas a sincronização de estro e estimulação ovariana para LOPU. Ambos os grupos foram submetidos a seis procedimentos LOPU em intervalos de sete dias e foram posteriormente submetidos à monta controlada e posterior diagnóstico de gestação para avaliar sua fertilidade. O estudo mostrou uma diminuição do número de folículos visualizados, na quantidade e na qualidade dos oócitos que foram recuperados e expostos à maturação in vitro. Tal como indicado pelo teste de fertilidade, no entanto, não foram observadas grandes complicações durante os procedimentos laparoscópicos que pudessem prejudicar o futuro reprodutivo dos animais. Portanto, foi obtido um número de oócitos viáveis, mesmo com a diminuição da eficiência reprodutiva, provando que repetidas LOPU não interferem na reprodutividade de animais adultos e pré-púberes. Estes resultados indicam um aspecto positivo desse procedimento, possibilitando um aumento da eficiência reprodutiva dessa espécie quando utilizado para a produção in vitro.
Assuntos
Animais , Laparoscopia , Oócitos , Cabras/classificaçãoRESUMO
O objetivo deste estudo foi comparar o número de folículos, oócitos e a taxa de recuperação em ovelhas submetidas ao protocolo one-shot com ou sem priming ovariano de benzoato de estradiol (BE). Ovelhas não lactantes (n=33), multíparas, com idade média de cinco anos (intervalo 4-6) e um escore de condição corporal de 3,0±0,3 foram divididas em três grupos. O grupo one-shot (n=10) foi tratado com um implante subcutâneo contendo 1,5 mg de norgestomet do D0 ao D10, além de receberem 0,04 mg de D-loprostenol, 200 UI de hormônio folículo estimulante (FSH) e 300 UI de gonadotrofina coriônica equina (eCG) no D8. As ovelhas do grupo BE (n=11) receberam o mesmo tratamento do oneshot e uma aplicação de 0,6 mg de BE no D0. Os animais do grupo não tratado (n=12) não receberam hormônios. A aspiração folicular foi realizada por laparotomia 36 horas após a administração da gonadotrofina (D10) e os oócitos pesquisados e classificados com base na morfologia. Observou-se um aumento (p 0,05) no número de folículos aspirados no grupo one-shot comparado com os grupos BE e não tratado (16,3±5,6 vs. 9,5±2,4 e 12,1±4,1) respectivamente. O número médio de oócitos e taxa de recuperação foram superiores (p 0,05) nos grupos one-shot e BE em comparação com o grupo não tratado, o que resultou em 14,2±9,0 e 87,1% (142/163), 11,0±6,2 e 91,4% (122/134) vs. 6,8±3,5 e 71,9% (82/114), respectivamente. Concl
The objective of this study was to compare the number of follicles, oocytes and the recovery rate in sheep submitted to the one-shot protocol with or without ovarian priming with estradiol benzoate (EB). Pluriparous non-lactating sheep (n=33) with an average age of five years (range 4-6) and a body condition score of 3.0±0.3 were divided into three groups. The one-shot group (n=10) was treated with a subcutaneous implant containing 1.5 mg of norgestomet from D0 to D10. The animals in this group were administered 0.04 mg of D-cloprostenol, 200 IU of follicle stimulating hormone (FSH) and 300 IU of equine chorionic gonadotropin (eCG) on D8. Animals in the EB group (n=11) received the same treatment as one-shot plus the administration of 0.6 mg of EB on D0. In the untreated group (n=12), the animals received no hormone stimulation. The collection of the oocytes was performed by laparotomy 36 h after the administration of gonadotropins (D10). Oocytes were searched and classified based on morphology. An increase was observed (p 0.05) in the number of follicles aspirated in the one-shot vs. the EB and untreated groups (16.3±5.6 vs. 9.5±2.4 and 12.1±4.1), respectively. The average number of oocytes and the recovery rate were higher (p 0.05) in the one-shot and EB groups compared to the untreated group, resulting in 14.2±9.0 and 87.1% (142/163), 11.0±6.2 and 91.4% (122/134) vs. 6
RESUMO
O objetivo deste estudo foi comparar o número de folículos, oócitos e a taxa de recuperação em ovelhas submetidas ao protocolo one-shot com ou sem priming ovariano de benzoato de estradiol (BE). Ovelhas não lactantes (n=33), multíparas, com idade média de cinco anos (intervalo 4-6) e um escore de condição corporal de 3,0±0,3 foram divididas em três grupos. O grupo one-shot (n=10) foi tratado com um implante subcutâneo contendo 1,5 mg de norgestomet do D0 ao D10, além de receberem 0,04 mg de D-loprostenol, 200 UI de hormônio folículo estimulante (FSH) e 300 UI de gonadotrofina coriônica equina (eCG) no D8. As ovelhas do grupo BE (n=11) receberam o mesmo tratamento do oneshot e uma aplicação de 0,6 mg de BE no D0. Os animais do grupo não tratado (n=12) não receberam hormônios. A aspiração folicular foi realizada por laparotomia 36 horas após a administração da gonadotrofina (D10) e os oócitos pesquisados e classificados com base na morfologia. Observou-se um aumento (p 0,05) no número de folículos aspirados no grupo one-shot comparado com os grupos BE e não tratado (16,3±5,6 vs. 9,5±2,4 e 12,1±4,1) respectivamente. O número médio de oócitos e taxa de recuperação foram superiores (p 0,05) nos grupos one-shot e BE em comparação com o grupo não tratado, o que resultou em 14,2±9,0 e 87,1% (142/163), 11,0±6,2 e 91,4% (122/134) vs. 6,8±3,5 e 71,9% (82/114), respectivamente. Concl
The objective of this study was to compare the number of follicles, oocytes and the recovery rate in sheep submitted to the one-shot protocol with or without ovarian priming with estradiol benzoate (EB). Pluriparous non-lactating sheep (n=33) with an average age of five years (range 4-6) and a body condition score of 3.0±0.3 were divided into three groups. The one-shot group (n=10) was treated with a subcutaneous implant containing 1.5 mg of norgestomet from D0 to D10. The animals in this group were administered 0.04 mg of D-cloprostenol, 200 IU of follicle stimulating hormone (FSH) and 300 IU of equine chorionic gonadotropin (eCG) on D8. Animals in the EB group (n=11) received the same treatment as one-shot plus the administration of 0.6 mg of EB on D0. In the untreated group (n=12), the animals received no hormone stimulation. The collection of the oocytes was performed by laparotomy 36 h after the administration of gonadotropins (D10). Oocytes were searched and classified based on morphology. An increase was observed (p 0.05) in the number of follicles aspirated in the one-shot vs. the EB and untreated groups (16.3±5.6 vs. 9.5±2.4 and 12.1±4.1), respectively. The average number of oocytes and the recovery rate were higher (p 0.05) in the one-shot and EB groups compared to the untreated group, resulting in 14.2±9.0 and 87.1% (142/163), 11.0±6.2 and 91.4% (122/134) vs. 6