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RESUMEN Objetivos: Conocer la diversidad genética de Aedes aegypti en el corredor vial transfronterizo Central-Alto Paraná de Paraguay, con registros de casos de dengue. Materiales y métodos: Se seleccionaron veinte hembras adultas de la eclosión de huevos de Ae. aegypti procedentes de casas geolocalizadas en los departamentos de Alto Paraná, Caaguazú, Cordillera y Central, entre el 2018 y 2019. Se extrajo ADN del tejido de las hembras para amplificación aleatoria de sus patrones polimórficos mediante amplificación aleatoria del ADN polimórfico por PCR (RAPD-PCR), usando cebadores H3 y B03 a fin de conocer parámetros genéticos de diversidad poblacional. Las relaciones entre las poblaciones de mosquitos según la localidad fueron visualizadas mediante análisis no apareado de la media aritmética. Las áreas idóneas de distribución geográfica real y potencial de estas poblaciones de Ae. aegypti fueron analizadas mediante DIVA-GIS 7.3.0 y MAXENT. Resultados: Se identificaron 40 loci mediante perfiles RAPD-PCR, con diferenciación génica moderada (Gst = 0,12). El corredor transfronterizo presentó condiciones bioclimáticas para la presencia de poblaciones variantes de Ae. aegypti, siendo determinantes en la distribución la precipitación del trimestre más cálido y la temperatura media del trimestre más seco. Conclusiones: Se evidencia que existe diversidad genética moderada en las poblaciones de Ae. aegypti procedentes de zonas con registros de casos de dengue ubicadas en el corredor vial transfronterizo que une los departamentos Central y Alto Paraná de Paraguay. El estudio de variabilidad genética de Ae. aegypti es de gran utilidad para la vigilancia entomoepidemiológica y evaluación de posibles eventos de resistencia al control químico.

ABSTRACT Objective: To determine the genetic diversity of Aedes aegypti in the Central-Alto Paraná cross-border road corridor of Paraguay, an area that has reports of dengue cases. Materials and methods: Twenty adult females were selected from hatching Ae. aegypti eggs from households geolocated in the departments of Alto Paraná, Caaguazú, Cordillera and Central, between 2018 and 2019. DNA was extracted from the tissue of females for amplifying their polymorphic patterns by random amplification of polymorphic DNA by PCR (RAPD-PCR), using primers H3 and B03 in order to identify genetic parameters of population diversity. The relationships between mosquito populations according to locality were observed by unpaired arithmetic mean analysis. We used DIVA-GIS 7.3.0 and MAXENT to analyze the suitable areas of actual and potential geographic distribution of these Ae. aegypti populations. Results: Forty loci were identified by RAPD-PCR profiling, with moderate gene differentiation (Gst = 0.12). The cross-border corridor presented bioclimatic conditions for the presence of variant populations of Ae. aegypti, with precipitation in the warmest quarter and mean temperature in the driest quarter being determinant in the distribution. Conclusions: There is evidence of moderate genetic diversity in Ae. aegypti populations from areas that have reported dengue cases in the cross-border road corridor linking the Central and Alto Paraná departments of Paraguay. The study of genetic variability of Ae. aegypti is very useful for entomo-epidemiological surveillance and evaluation of possible resistance to chemical control.

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AIM: To characterize the genetic variability of Streptococcus mutans isolates and to correlate this variability with different colonization profiles observed during dental caries in a sample of children. METHODS: S. mutans samples were isolated from the saliva of 30 children with varying histories of dental caries, and they were characterized according to morphological and biochemical markers and the sequences of their 16S-23S intergenic spacer region. The genetic variability of the isolates was first assessed using Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) markers. Next, the isolates were differentiated by sequencing a specific region of the gene encoding the enzyme glucosyltransferase B (gtfB). RESULTS: Characterization using RAPD markers uncovered significant genetic variability among the samples and indicated the existence of clusters, which allowed us to reconstruct both the origin and clinical history of the disease. By sequencing the 16S-23S intergenic region, it was found that all of the isolates belonged to the species S. mutans. Based on the genetic similarity of the isolates and pattern of amino acid variations identified by partial sequencing of the gtfB gene, base-pair changes were identified and correlated with different virulence patterns among the isolates. CONCLUSIONS: The partial sequencing of the gtfB gene can be a useful tool for elucidating the colonization patterns of S. mutans. As amino acid variations are likely to be correlated with differences in biological risk, molecular characterization, such as that described in this paper, could be the key for assessing the development of dental caries in children...

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Objetivo: el objetivo de este estudio fue analizar el genotipo y susceptibilidad antimicrobiana de Pseudomonas aeruginosa de pacientes con fibrosis quística y otras patologías. Materiales y métodos: se analizaron 20 aislados de pacientes con fibrosis quística y 20 de pacientes con otras enfermedades por medio de la prueba de susceptibilidad antimicrobiana por microdilución en caldo y técnica del ADN polimorfo amplificado aleatorio. Resultados: se observó que los aislados de pacientes con fibrosis quística presentaron mayor resistencia (56 %) en comparación con aislados de pacientes sin fibrosis quística (25 %). Los antimicrobianos más efectivos en ambos grupos fueron cefepima, ceftriaxona y meropenem. Desde el punto de vista genotípico, se observa heterogeneidad entre las cepas de pacientes con fibrosis quística y dos grupos con cepas idénticas de origen hospitalario, lo que sugiere una posible transmisión cruzada. Conclusión: Concluimos que los porcentajes de resistencia de Pseudomonas aeruginosa en este estudio son altas, y este hallazgo se acentúa en el caso de pacientes con fibrosis quística, lo cual deja muy pocas opciones de tratamiento. La tipificación por técnica del ADN polimórfico amplificado aleatorio permitió conocer la variabilidad de genotipos para tener control sobre la transmisión de cepas, lo cual constituye un tópico de importancia en el sistema de salud y el mejoramiento de la calidad de vida de los pacientes.

Objective: Our aim was to analyze genotype and antimicrobial susceptibility of Pseudo-monas aeruginosa from cystic fibrosis patients and other diseases. Materials and methods: We analyzed 20 isolates from cystic fibrosis patients and 20 from patients with other diseases by dilution antimicrobial susceptibility test and random amplified polymorphic DNA technique. Results: We found that isolates from cystic fibrosis patients had higher resistance (56 %) than isolates from patients without cystic fibrosis (26 %). The most effective antimicrobi-als in both groups were cefepime, ceftriaxone and meropenem. With regard to the geno-type, we observed heterogeneity between strains from cystic fibrosis patients and two clus-ters with identical strains from hospital origin, suggesting a possible cross transmission. Conclusion: We concluded that the resistance rate of Pseudomonas aeruginosa in this study was high and this finding is accentuated in patients with cystic fibrosis, leaving few treatment options. Typification by random amplified polymorphic DNA technique allowed us to know the variability of genotypes to control strain transmission; this is an important topic to optimize health services and the quality of life of our patients.

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INTRODUCCIÓN: la leishmaniosis ha sido clasificada por la Organización Mundial de la Salud como una de las enfermedades tropicales más importantes. El control de esta parasitosis es muy difícil, porque no existen vacunas y el tratamiento es tóxico e insatisfactorio. Es de crucial importancia establecer un método de diagnóstico oportuno junto a la identificación del parásito, lo cual incide en la selección del tratamiento adecuado y en el diseño de las medidas de control apropiadas. Recientemente, los avances en biología molecular han permitido la caracterización de especies de Leishmania por diferentes métodos. La técnica de ADN polimórfico amplificado al azar es una técnica simple para detectar el polimorfismo genético del ADN. OBJETIVO: estandarizar la técnica de ADN polimórfico amplificado al azar para su utilización en la tipificación de especies de Leishmania del Nuevo Mundo. MÉTODOS: empleando una concentración de cebador de 5 pmol, 75 ng de ADN molde, 2 mM de cloruro de magnesio y 2 U de Taq ADN polimerasa en 25 mL de reacción, se obtuvieron patrones de amplificación reproducibles. La técnica optimizada de ADN polimórfico amplificado al azar se empleó para determinar las diferencias genéticas entre 10 cepas de referencia de Leishmania, con la utilización de 6 juegos de cebadores comerciales diseñados al azar. La relación filogenética entre las especies estudiadas se determinó utilizando la estrategia de agrupaciones mediante el método de UPGMA. RESULTADOS: los cebadores OPA 3, 4 y 8 permitieron diferenciar las 10 cepas de referencia de Leishmania estudiadas. Se obtuvieron 2 grupos genéticos bien definidos donde se agrupan las especies del subgénero Leishmania y Viannia, respectivamente; los 2 subgéneros mostraron diferencias genéticas. CONCLUSIONES: de esta forma se cuenta en el laboratorio con la técnica del ADN polimórfico amplificado al azar optimizada para la identificación de especies de Leishmania.

INTRODUCTION: leishmaniosis has been regarded by the World Health Organization as one of the most important tropical diseases. It is very difficult to control such parasitosis because there are not vaccines, and therapy is generally toxic and unsatisfactory. It is of vital importance to set prompt diagnostic method along with identification of the parasite in order to select the suitable treatment and to design the most convenient control measures. Recently, the advances in molecular biology have made it possible to characterize Leishmania species by different methods. The random amplified polymorphic DNA technique is a simple method to detect the genetic polymorphic DNA. OBJECTIVE: to standardize the random amplified polymorphic DNA technique for its use in New World Leishmania species typing. METHODS: by using 5 pmol primer concentration, 75 ng of template DNA, 2 mM of magnesium chloride and 2 U of polymerase DNA Taq in 25µL reaction, two reproducible amplification patters were obtained. The optimized random amplified polymorphic DNA technique served to determine the genetic differences among ten reference strains of Leishmania, with 6 sets of randomly designed conventional primers. The UP GMA method-based grouping strategy determined the phylogenetic relation among the studied species. RESULTS: OPA primers -3, 4 and 8 allowed distinguishing the ten reference strains of Leishmania under study. Two well defined genetic groups including species of Leishmania and Viannia subgenres were obtained; these 2 subgenres showed genetic differences. CONCLUSIONS: in this way, our laboratory has the optimized random amplified polymorphic DNA for the identification of Leishmania species.

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OBJETIVO: Caracterizar molecularmente los aislamientos de Klebsiella pneumoniae obtenidos de pacientes pediátricos y del personal de salud en la unidad de cuidados intensivos de un hospital de tercer nivel de atención en la Ciudad de México, Distrito Federal. MATERIAL Y MÉTODOS: Se analizaron 15 aislamientos de Klebsiella pneumoniae colectadas de un brote durante el mes de junio de 1996, ocho de pacientes y siete de personal del Hospital Infantil de México. Los aislamientos fueron caracterizados por electroforesis en gel de campos pulsados (EGCP), amplificación azarosa del polimorfismo de ADN por reacción en cadena de la polimerasa (AAPD-PCR), y serotipificación, isoelectroenfoque de beta-lactamasas y secuenciación nucleotídica de productos de la reacción en cadena de la polimerasa. RESULTADOS: El serotipo predominante fue el 61 y correlacionó con los perfiles de AAPD-PCR y EGCP en 11 de los 15 aislamientos. Se identificó una clona predominante productora de SHV-5 con una alta letalidad. CONCLUSIONES: Las técnicas de biología molecular fueron herramientas muy útiles en la caracterización de la clona de K. pneumoniae identificada en pacientes y el personal hospitalario, que sugirieron una posible transmisión cruzada. Estos resultados ilustran que se debe apoyar el fortalecimiento de los programas de control para evitar la diseminación de infecciones nosocomiales en esa unidad en estudio.

OBJECTIVE: To perform the molecular characterization of Klebsiella pneumoniae isolates from pediatric patients and health care workers at the intensive care unit of a tertiary care hospital in Mexico City. MATERIAL AND METHODS: Fifteen Klebsiella pneumoniae isolates collected during an outbreak in June 1996 were analyzed; eight were from patients and seven from health care workers of Mexico's Children's Hospital. Characterization of isolates was carried out by pulsed field gel electrophoresis (PFGE), random amplified polymorphic DNA polymerase chain reaction (RAPD-PCR) and serotyping, beta-Lactamase isoelectric focusing (IEF), and nucleotide sequencing of PCR products. RESULTS: Serotype 61 was predominant and correlated with genomic fingerprints of RAPD and PFGE in 11 of 15 isolates. One SHV-5-producer predominant clone with a high case-fatality rate was identified. CONCLUSIONS: Molecular biology techniques are useful tools to characterize the K. pneumoniae clone isolated from patients and health care workers, suggesting potential cross-transmission. These data call for strengthening control programs to prevent dissemination of nosocomial infections in the studied hospital.

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