RESUMO
AIM: To examine the effect of Fusobacterium nucleatum (F. nucleatum) on the microenvironment of colonic neoplasms and the expression of inflammatory mediators and microRNAs (miRNAs). METHODS: Levels of F. nucleatum DNA, cytokine gene mRNA (TLR2, TLR4, NFKB1, TNF, IL1B, IL6 and IL8), and potentially interacting miRNAs (miR-21-3p, miR-22-3p, miR-28-5p, miR-34a-5p, miR-135b-5p) were measured by quantitative polymerase chain reaction (qPCR) TaqMan® assays in DNA and/or RNA extracted from the disease and adjacent normal fresh tissues of 27 colorectal adenoma (CRA) and 43 colorectal cancer (CRC) patients. KRAS mutations were detected by direct sequencing and microsatellite instability (MSI) status by multiplex PCR. Cytoscape v3.1.1 was used to construct the postulated miRNA:mRNA interaction network. RESULTS: Overabundance of F. nucleatum in neoplastic tissue compared to matched normal tissue was detected in CRA (51.8%) and more markedly in CRC (72.1%). We observed significantly greater expression of TLR4, IL1B, IL8, and miR-135b in CRA lesions and TLR2, IL1B, IL6, IL8, miR-34a and miR-135b in CRC tumours compared to their respective normal tissues. Only two transcripts for miR-22 and miR-28 were exclusively downregulated in CRC tumour samples. The mRNA expression of IL1B, IL6, IL8 and miR-22 was positively correlated with F. nucleatum quantification in CRC tumours. The mRNA expression of miR-135b and TNF was inversely correlated. The miRNA:mRNA interaction network suggested that the upregulation of miR-34a in CRC proceeds via a TLR2/TLR4-dependent response to F. nucleatum. Finally, KRAS mutations were more frequently observed in CRC samples infected with F. nucleatum and were associated with greater expression of miR-21 in CRA, while IL8 was upregulated in MSI-high CRC. CONCLUSION: Our findings indicate that F. nucleatum is a risk factor for CRC by increasing the expression of inflammatory mediators through a possible miRNA-mediated activation of TLR2/TLR4.
Assuntos
Adenoma/genética , Carcinogênese/genética , Neoplasias Colorretais/genética , Fusobacterium nucleatum/isolamento & purificação , Mediadores da Inflamação/metabolismo , MicroRNAs/metabolismo , Adenoma/microbiologia , Adenoma/patologia , Idoso , Neoplasias Colorretais/microbiologia , Neoplasias Colorretais/patologia , DNA Bacteriano/isolamento & purificação , Regulação para Baixo , Feminino , Fusobacterium nucleatum/genética , Regulação Neoplásica da Expressão Gênica , Humanos , Masculino , Instabilidade de Microssatélites , Mutação , Proteínas Proto-Oncogênicas p21(ras)/genética , RNA Mensageiro/metabolismo , Receptor 2 Toll-Like/genética , Receptor 2 Toll-Like/metabolismo , Receptor 4 Toll-Like/genética , Receptor 4 Toll-Like/metabolismo , Microambiente Tumoral/genética , Regulação para CimaRESUMO
CONTEXT: The association between Helicobacter pylori infection and colon neoplasia has been the subject of recent investigations which have produced controversial results. OBJECTIVE: To evaluate the prevalence of H. pylori infection in patients with colonic adenomas and also in patients whose colonoscopy exams were normal. METHODS: After colonoscopy, the individuals were distributed into two groups: patients with colon adenomas (cases) and patients whose colons were normal (controls). The groups were similar regarding age and gender. The individuals of both groups were subjected to a dosage of IgG antibody against H. pylori. The dosage was applied according to the solid phase, chemiluminescent immunometric assay. The chi-square test was used to analyze the data. RESULTS: There were 30 men and 64 women in each group (94 cases and 94 controls). The mean age of the cases was 59.79 +/- 12.25 years and that of the controls was 58.98 +/- 11.55 years. The H. pylori serology was positive for 66 (70.21%) of the cases and for 51 (54.25%) of the controls. There was a significant difference (P = 0.024). The odds ratio was 1.98 (CI 95%, 0.82-3.15). The prevalence of H. pylori in cases and controls according to gender, histological type and location of the colon lesions showed a significant difference only among women (P = 0.03), among patients with tubular adenomas (P = 0.03), and in those with distal adenomas (P = 0.038). CONCLUSION: There is a positive association between H. pylori infection and colonic adenomas. This association is more evident in women, especially for tubular adenomas and distal colonic location.
Assuntos
Adenoma/microbiologia , Neoplasias do Colo/microbiologia , Infecções por Helicobacter/epidemiologia , Helicobacter pylori , Adulto , Idoso , Idoso de 80 Anos ou mais , Anticorpos Antibacterianos/sangue , Biomarcadores , Brasil/epidemiologia , Estudos de Casos e Controles , Feminino , Infecções por Helicobacter/complicações , Infecções por Helicobacter/diagnóstico , Helicobacter pylori/imunologia , Hospitais Universitários , Humanos , Imunoensaio , Imunoglobulina G/sangue , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Prevalência , Estudos Soroepidemiológicos , Adulto JovemRESUMO
CONTEXT: The association between Helicobacter pylori infection and colon neoplasia has been the subject of recent investigations which have produced controversial results. OBJECTIVE: To evaluate the prevalence of H. pylori infection in patients with colonic adenomas and also in patients whose colonoscopy exams were normal. METHODS: After colonoscopy, the individuals were distributed into two groups: patients with colon adenomas (cases) and patients whose colons were normal (controls). The groups were similar regarding age and gender. The individuals of both groups were subjected to a dosage of IgG antibody against H. pylori. The dosage was applied according to the solid phase, chemiluminescent immunometric assay. The chi-square test was used to analyze the data. RESULTS: There were 30 men and 64 women in each group (94 cases and 94 controls). The mean age of the cases was 59.79 ± 12.25 years and that of the controls was 58.98 ± 11.55 years. The H. pylori serology was positive for 66 (70.21 percent) of the cases and for 51 (54.25 percent) of the controls. There was a significant difference (P = 0.024). The odds ratio was 1.98 (CI 95 percent, 0.82-3.15). The prevalence of H. pylori in cases and controls according to gender, histological type and location of the colon lesions showed a significant difference only among women (P = 0.03), among patients with tubular adenomas (P = 0.03), and in those with distal adenomas (P = 0.038). CONCLUSION: There is a positive association between H. pylori infection and colonic adenomas. This association is more evident in women, especially for tubular adenomas and distal colonic location.
CONTEXTO: A associação entre a infecção pelo Helicobacter pylori e as neoplasias de cólon tem motivado alguns estudos recentes, porém os resultados ainda são controversos. OBJETIVO: Avaliar a prevalência da infecção pelo H. pylori em pacientes com adenomas colônicos e naqueles com cólons normais à colonoscopia. MÉTODOS: Após as colonoscopias, distribuíram-se os indivíduos em dois grupos: pacientes com adenomas de cólon (casos) e pacientes com cólons normais (controles), pareados por idade e sexo. Em ambos os grupos, realizou-se dosagem sérica de IgG contra o Helicobacter pylori através de ensaio imunométrico quimioluminescente em fase sólida. Os dados foram analisados pelo teste do qui ao quadrado. RESULTADOS: Foram 94 casos e 94 controles, 30 homens e 64 mulheres em cada grupo. A idade média dos casos e controles foi de 59,79 ± 12,25 anos e 58,98 ± 11,55 anos, respectivamente. A sorologia para Helicobacter pylori foi positiva em 66 (70,21 por cento) casos e em 51 (54,25 por cento) controles, diferença estatisticamente significativa (P = 0,024). O "odds ratio" foi de 1,98 (CI 95 por cento, 0,82 - 3,15). A prevalência de Helicobacter pylori em casos e controles de acordo com o sexo, tipo histológico e localização das lesões no cólon somente apresentou diferença significativa entre as mulheres (P = 0,03), pacientes com adenomas tubulares (P = 0,03) e naqueles com adenomas distais (P = 0,038). CONCLUSÕES: Há associação positiva entre a infecção pelo H. pylori e os adenomas colônicos. Esta relação é mais evidente em mulheres, em adenomas tubulares e de localização colônica distal.
Assuntos
Adulto , Idoso , Idoso de 80 Anos ou mais , Feminino , Humanos , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Adulto Jovem , Adenoma/microbiologia , Neoplasias do Colo/microbiologia , Helicobacter pylori , Infecções por Helicobacter/epidemiologia , Anticorpos Antibacterianos/sangue , Biomarcadores , Brasil/epidemiologia , Estudos de Casos e Controles , Hospitais Universitários , Infecções por Helicobacter/complicações , Infecções por Helicobacter/diagnóstico , Helicobacter pylori/imunologia , Imunoensaio , Imunoglobulina G/sangue , Prevalência , Estudos Soroepidemiológicos , Adulto JovemRESUMO
Cultura primária de células derivadas do adenoma pleomórfico humano (AP2) foi estabelecida e utilizada em estudos de resposta à açäo de proteínas da matriz extra-celular (MEC). As células cultivadas foram caracterizadas como mio-epitelial símile por imunocitoquímica e microscopia eletrônica de transmissäo (MET). Células AP2 cresceram em contato com as seguintes proteínas da MEC: lamina, colágeno I, colágeno IV e membrana basal reconstituída (Matrigel). Laminina e colágenos tipos I e IV, quando aplicados individualmente, näo causaram efeito no fenótipo das células AP2. No entanto, células crescidas em Matrigel mostraram importantes alteraçöes fenotípicas, dependendo do modo de aplicaçäo do substrato. Células crescidas sobre finas camadas de Matrigel desenvolveram fenótipo estrelado, com prolongamentos delicados, longos e intercomunicantes, lembrando as células mio-epiteliais normais. Células crescidas dentro de massas de Matrigel formaram agrupamentos tri-dimensionais. Ao microscópio confocal e MET esses agrupamentos apresentaram dupla camada de células epitelióides delimitando espaços luminais. As células próximas aos lúmens eram cubóides, com vilosidades apicais e complexo juncional. Nosso trabalho forneceu uma evidência direta demonstrando que a formaçäo de estruturas luminais do adenoma pleomórfico somente ocorre quando suas células säo tri-dimensionalmente envoltas por membrana basal. Paralelamente a esse estudo, foi analisada a distribuiçäo do filamento intermediário vimentina no citoplasma de células AP2. Nessa célula, a vimentina distribui-se como filamentos pequenos, completamente segregados da rede principal. A maioria desses filamentos näo co-localiza com microtúbulos. Análise da relaçäo vimentina-microtúbulos nas células AP2 mostrou que essas estruturas somente interagem quando os filamentos de vimentina se estendem em direçäo à periferia da célula