RESUMO
La embriogénesis somática representa una herramienta esencial en el mejoramiento genético y en la micropropagación clonal masiva de bananos mejorados. En el presente trabajo se analizaron los patrones morfológicos y anatómicos que ocurren durante la embriogénesis somática del banano Williams, dirigidos a conocer y mejorar este proceso. En la investigación se establecieron suspensiones celulares embriogénicas (SCE) a partir de callo embriogénico obtenido de manos florales inmaduras masculinas, las cuales originaron abundantes embriones que regeneraron plantas. Hacia los tres meses de cultivo se detectaron embriones somáticos (ES) primarios color blanco-crema en las manos florales de los nudos nueve a doce, contados a partir del ápice floral. Al cuarto mes estos ES primarios dieron origen al callo embriogénico, de color blanco crema, estructura granular, con abundantes ES torpedo en su periferia y con una organización celular en tres diferentes zonas. De este callo se cultivaron porciones pequeñas con ES torpedo en medio de multiplicación durante dos meses, dando origen a la SCE I. La misma se tamizó (250 µm) para establecer la SCE II. El sedimento de células y los agregados celulares embriogénicos de ambas SCE se trasladó a medio de maduración. Transcurridos dos meses los embriones maduros se transfirieron a medio de conversión de embriones, lográndose regenerar plantas completas a partir de las dos semanas. Las SCE produjeron numerosos embriones somáticos maduros y mostraron una buena conversión de embriones a plantas y regeneración de plantas. Este sistema de embriogénesis somática permitió la obtención de plantas funcionales en nueve meses.
Somatic embryogenesis represents an essential tool for the genetic improvement and for the mass clonal micropropagation of the improved banana plant. In this present work morphological and anatomical patterns were analyzed in the somatic embryogenesis of Williams banana, to know and enhance this process. In the investigation embryogenic cell suspensions (ECS) were established from embryogenic callus obtained from floral immature male hands, which gave rise to many somatic embryos that regenerated plants. Towards the three months of culture white-cream primary somatic embryos (SE) were detected in the floral hands of the nodes nine to twelve, counted from the floral apex. At the fourth month this primary SE gave origin to a creamy-white embryogenic callus, with granular structure and abundant SE torpedo on its periphery. Cell organization with three different zones was observed in callus. Small portions of this callus were cultivated in the multiplication medium for two months, to originate ECS I. This ECS was filtered through a mesh (250 µm pore size) to establish the ECS II. The sediment of embryogenic cells and cell clusters of the ECS were moved to maturation media. After two months the mature embryos were transferred to conversion medium, and two weeks later, whole plants were developed. The ECS produced numerous mature SE, which showed good conversion of embryos into plants and plant regeneration. This system of somatic embryogenesis permitted the mass production of functional plants in nine months.
Assuntos
Criação de Embriões para Pesquisa/métodos , Cultura Primária de Células/métodos , Pesquisas com Embriões , Melhoramento Genético/métodos , Técnicas de Cultura Embrionária/instrumentação , Técnicas de Cultura Embrionária/métodos , Produção Agrícola , Desenvolvimento Embrionário , Meios de Cultura/análiseRESUMO
A produção in vitro de embriões em cães pode auxiliar na compreensão de inúmeros fenômenos fisiológicos como o crescimento, a maturação e a fecundação de oócitos e ainda se apresenta como alternativa para contornar obstáculos reprodutivos inerentes à espécie. Além disso, os conhecimentos adquiridos com esta técnica podem ser utilizados para a preservação de cães selvagens ameaçados de extinção. Entretanto a existência de diferenças na fisiologia reprodutiva canina quando comparado aos demais mamíferos domésticos, resulta em uma dificuldade em maiores avanços na produção in vitro de embriões nessa espécie. Nesse sentido inúmeros estudos vêm sendo realizados para desenvolver biotécnicas que venham a auxiliar na compreensão da fisiologia reprodutiva canina, bem como tentar solucionar o entrave da produção in vitro de embriões. Dessa forma, esta revisão tem como objetivo, relatar os avanços obtidos até o momento no crescimento e maturação in vitro de oócitos de cães domésticos, assim como discorrer sobre as estratégias utilizadas até o presente momento para aumentar a produção in vitro de embriões caninos, utilizando-se oócitos oriundos tanto de folículos pré-antrais como de folículos antrais.
The in vitro embryo production in dogs can help the understanding of several physiological processes such as growth, maturation and fertilization of oocytes, and also represents an alternative to overcome reproductive obstacles in this species. Moreover, the knowledge obtained from this technique can be used for the preservation of endangered wild dogs However, the existence of differences between dogs and other domestic species regarding the reproductive physiology in these species difficult major advances in the in vitro embryo production in dogs. In this regard, many studies were conducted to developing biotechniques which will help to understand the canine reproductive physiology, as well as to try to solve the obstacle on in vitro production of embryon. Thus, this review aims to address the progress obtained so far in the in vitro growth and maturation of oocytes from domestic dogs, as to address the strategies used until the present moment to improve the in vitro production of canine embryo, using oocyte from both preantral and antral follicles.
Assuntos
Feminino , Animais , Cães , Oócitos/crescimento & desenvolvimento , Técnicas In Vitro/veterinária , Criação de Embriões para Pesquisa/métodosRESUMO
A produção in vitro de embriões em cães pode auxiliar na compreensão de inúmeros fenômenos fisiológicos como o crescimento, a maturação e a fecundação de oócitos e ainda se apresenta como alternativa para contornar obstáculos reprodutivos inerentes à espécie. Além disso, os conhecimentos adquiridos com esta técnica podem ser utilizados para a preservação de cães selvagens ameaçados de extinção. Entretanto a existência de diferenças na fisiologia reprodutiva canina quando comparado aos demais mamíferos domésticos, resulta em uma dificuldade em maiores avanços na produção in vitro de embriões nessa espécie. Nesse sentido inúmeros estudos vêm sendo realizados para desenvolver biotécnicas que venham a auxiliar na compreensão da fisiologia reprodutiva canina, bem como tentar solucionar o entrave da produção in vitro de embriões. Dessa forma, esta revisão tem como objetivo, relatar os avanços obtidos até o momento no crescimento e maturação in vitro de oócitos de cães domésticos, assim como discorrer sobre as estratégias utilizadas até o presente momento para aumentar a produção in vitro de embriões caninos, utilizando-se oócitos oriundos tanto de folículos pré-antrais como de folículos antrais.(AU)
The in vitro embryo production in dogs can help the understanding of several physiological processes such as growth, maturation and fertilization of oocytes, and also represents an alternative to overcome reproductive obstacles in this species. Moreover, the knowledge obtained from this technique can be used for the preservation of endangered wild dogs However, the existence of differences between dogs and other domestic species regarding the reproductive physiology in these species difficult major advances in the in vitro embryo production in dogs. In this regard, many studies were conducted to developing biotechniques which will help to understand the canine reproductive physiology, as well as to try to solve the obstacle on in vitro production of embryon. Thus, this review aims to address the progress obtained so far in the in vitro growth and maturation of oocytes from domestic dogs, as to address the strategies used until the present moment to improve the in vitro production of canine embryo, using oocyte from both preantral and antral follicles.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Cães , Técnicas In Vitro/veterinária , Oócitos/crescimento & desenvolvimento , Criação de Embriões para Pesquisa/métodosRESUMO
The relationship between the level of cell confluence near the plateau phase of growth and blastocyst yield following somatic cell cloning is not well understood. We examined the effect of distinct cell culture confluence levels on in vitro development of cloned bovine embryos. In vitro-matured bovine oocytes were manually bisected and selected by DNA staining. One or two enucleated hemi-cytoplasts were paired and fused with an adult skin somatic cell. Cultured skin cells from an adult Nellore cow harvested at three distinct culture confluence levels (70-80, 80-90, and >95%) were used for construction of embryos and hemi-embryos. After activation, structures were cultured in vitro as one embryo (1 x 100%) or as aggregates of two hemi-embryos (2 x 50%) per microwell. Fusion, cleavage and blastocyst rates were compared using the chi(2) test. The fusion rate for hemi-embryos (51.4%) was lower than for embryos (67.6%), with no influence of degree of cell confluence. However, blastocyst rates improved linearly (7.0, 17.5, and 29.4%) with increases in cell confluence. We conclude that degree of cell culture confluence significantly influences subsequent embryo development; use of a cell population in high confluence (>90%) for nuclear transfer significantly improved blastocyst yield after cloning.