RESUMO
Resumen Objetivo: Establecer un inmunoensayo semicuantitativo para la detección de anticuerpos contra el dominio de unión al receptor de la proteína de espícula del coronavirus del síndrome respiratorio agudo grave tipo 2 y la evaluación de su desempeño como herramienta de apoyo diagnóstico. Métodos: Se generó una proteína recombinante del dominio de unión a receptor de la proteína de espícula del coronavirus del síndrome respiratorio agudo grave tipo 2. Dicha proteína se empleó como sustrato antigénico en la estandarización de dos ensayos semicuantitativos por inmunoadsorción ligados a enzima para la detección de inmunoglobulinas M e inmunoglobulinas G humanas. Se utilizó un conjunto de muestras de suero positivas (n=129), provenientes de donantes voluntarios con infección previa por el virus SARS-CoV-2, confirmada mediante reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa reversa, y tomadas entre agosto de 2020 y noviembre de 2021. Además, se empleó un panel de muestras prepandémicas negativas (n=196) obtenidas antes de diciembre de 2019 para la evaluación del desempeño de los ensayos; se recibieron muestras múltiples seriadas de 99 donantes voluntarios para examinar la respuesta de la prueba ante la seroconversión y se estudió la posible asociación entre las seropositividades por coronavirus del síndrome respiratorio agudo grave tipo 2 y por el virus del dengue para la evaluación de reacciones cruzadas inespecíficas. Resultados: El ensayo de detección de inmunoglobulina G mostró 81.4 % de sensibilidad, 86.2 % de especificidad y valores predictivos positivos y negativos de 79.5 % y 87.6 % respectivamente. Por su parte, el ensayo de detección de inmunoglobulina M mostró solamente 72.1 % de sensibilidad, 54.1 % de especificidad y valores predictivos positivos y negativos de 25.6 % y 89.8 % respectivamente. No se encontraron diferencias significativas entre las mediciones semicuantitativas según sexo ni correlación lineal entre esta variable y la edad. Los valores obtenidos para el inmunoensayo presentaron diferencias significativas según el autorreporte de presencia o ausencia de síntomas compatibles con COVID-19. No se encontró correlación entre las seropositividades contra el coronavirus del síndrome respiratorio agudo grave tipo 2 y el virus del dengue. El ensayo de detección de inmunoglobulina G generó valores inferiores pero constantes en muestras de donantes voluntarios que autorreportaron no haber tenido contacto con el virus SARS-CoV-2. En contraste, las muestras de donantes expuestos al virus SARS-CoV-2 mostraron valores elevados pero variables en magnitud. Además, se observaron valores elevados y variables en muestras de voluntarios vacunados o con infección previa. Conclusiones: Nuestro ensayo de detección de inmunoglobulina M presenta escaso valor diagnóstico. Por el contrario, el ensayo de detección de inmunoglobulina G muestra un rendimiento satisfactorio y se apega al comportamiento reportado para este tipo de prueba según las características demográficas y clínicas de los usuarios; por lo tanto, este ensayo podría ser empleado como herramienta fiable y práctica en aplicaciones clínicas y como apoyo al diagnóstico. Es necesario desarrollar más estudios sobre reacciones cruzadas entre los anticuerpos contra el coronavirus del síndrome respiratorio agudo grave tipo 2 con aquellos de otras entidades de interés clínico, sobre todo las presentes en países tropicales como el nuestro.
Abstract Aim: To establish a semiquantitative immunoassay for antibody detection against the RBD of the severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 spike protein and to evaluate its performance to be used as a diagnostic supporting tool. Methods: A recombinant severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 spike protein was produced. This protein was used as antigenic substrate in two semiquantitative enzyme-linked immunoassays for the detection of human immunoglobulins M and immunoglobulins G. A set of serum samples (N=129) from patients with prior viral infection confirmed by reverse transcription polymerase chain reaction, processed between August 2020 and November 2021, were used as positive samples. A panel of pre-pandemic samples (N=196), obtained prior to December 2019, were used as negative samples to evaluate the assay performance. Multiple samples from 99 volunteers were used to examine test response to seroconversion. The interference between seropositivity against severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 and dengue virus was also evaluated. Results: The immunoglobulin G detection assay showed 81.4% sensitivity, 86.2% specificity, and positive and negative predictive values of 79.5% and 87.6% respectively. The immunoglobulin M detection assay yielded 72.1% sensitivity, 54.1% specificity, and positive and negative predictive values of 25.6% and 89.8% respectively. No significant differences were found between the measurements according to sex or linear correlation between this variable and age. The values presented significant differences according to the condition of self-reported presence or absence of COVID-19 like symptoms. No correlation was found between seropositivity for severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 and dengue virus. The immunoglobulin G detection assay generated lower but constant values on samples from voluntary donors who reported not having any contact with the virus compared to samples from donors exposed to it, and high but variable values in magnitude on samples from vaccinated volunteers or those with previous severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 infection compared to samples from donors without exposure to the viral antigen. Conclusions: Our established immunoglobulin M detection assay presents poor diagnostic value. On the other hand, the immunoglobulin G detection assay shows satisfactory performance, and coheres to the behavior reported for this type of test according to the demographic and clinic characteristics of the volunteer, so it could be used as a reliable and practical tool in clinical applications and as diagnostic complement. It is necessary to develop more studies on cross-reactions of antibodies against severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 with other entities of clinical interest and present in our tropical area.
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Pré-Escolar , Criança , Adolescente , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Idoso , Imunoensaio , SARS-CoV-2/imunologia , Imunoglobulina G/análise , Imunoglobulina M/análise , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/tendências , Costa Rica , COVID-19RESUMO
La tuberculosis es una patología frecuente en países en vías de desarrollo. En Colombia la prevalencia está en cifras de 35 a 58 casos por cada 100000 habitantes. Aunque la vaciloscopia (tinción de Ziehl Neelsen) es el procedimiento más usado en el diagnóstico, por su baja sensibilidad se cree que un porcentaje importante de casos no es diagnosticado. La utilidad del serodiagnóstico es una realidad que amerita estudios en Colombia. En el presente trabajo se estudió una población de 70 pacientes con tuberculosis (tuberculosis pulmonar n=62, extrapulmonar n=8) y un grupo control de 89 sujetos (sanos, contactos de tuberculosis, con secuelas de tuberculosis ya curada (extyberculosis), con patología pulmonar no tuberculosa y miscelánea). Se utilizaron tres Antígenos (Ag) crudos (Ag sedimento no sonicado (P-2), Ag sedimento sonicado (SO-1) y sobrenadante sonicado (SO-2) y un Ag purificado (GT 38 KDa) a través de la técnica de ELISA. Los resultados obtenidos con los diferentes Ag fueron: Sensibilidad de 60 por ciento para P-2, 72 por ciento para SO-1,81 por ciento para SO-2 y 78 por ciento para GT-38 KDa; con especificidades de 89 por ciento para P-2, 65 por ciento para SO-1,60 por ciento para SO-2 y 78 por ciento para GT-38 kDa respectivamente. Hubo diferencias significativas (p<0.05) al comparar los resultados obtenidos entre los Ag sedimento no sonicado P-2 y sobrenadante sonicado SO-2 y entre los GT-38 kDa y sedimoento no sonicado P-2. Los resultados de este trabajo demuestran la utilidad del serodiagnóstico de la tuberculosis en nuestro medio
Assuntos
Humanos , Tuberculose/diagnóstico , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/estatística & dados numéricos , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/tendências , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/estatística & dados numéricosRESUMO
Se realizó un estudio descriptivo prospectivo en el que se valoró la técnica de ELISA (Captia Syphilis G, Mercia Diagnostic, Guilford, England) para detectar anticuerpos anti-Treponema pallidum de la clase inmunoglobulina G. El antígeno utilizado fue extracto protéico de T. pallidum perteneciente a la cepa Nichols. Para comparar la ELISA Captia Syphilis G se utilizó la técnica de inmunofluorescencia indirecta FTA-Abs. Se evaluaron 100 sueros de pacientes cuya distribución fue: 60 sueros de pacientes enfermos de sifilis, 20 sueros de paciente sanos sin enfermedades de trasmisión sexual conocida, 15 sueros de pacientes con enfermedades del colágeno y 5 sueros de pacientes con tuberculosis. La sensibilidad de ELISA Captia Syphilis G fue del 98.4 por ciento mientras que FTA-Abs fue del 100 por ciento. La especificidad de ELISA Captia Syphilis fue del 100 por ciento y del FTA-Abs del 97.3 por ciento. Esta técnica podría ser incluida en Colombia como prueba confirmatoria para el diagnóstico de sífilis por su alta sensibilidad y especificidad, sumado a la facilidad de su realización, sencillez del procedimiento y economía, que ofrece resultados objetivos y confiables
Assuntos
Humanos , Sorodiagnóstico da Sífilis/normas , Sorodiagnóstico da Sífilis/tendências , Sorodiagnóstico da Sífilis , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/normas , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/tendências , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/estatística & dados numéricosRESUMO
We comparaed the granuloma morphology and immune response of hamsters inoculated with Paracoccidioides brasiliensis (Pb) into the cheek pouch, which lacks lymphatic drainage, and the ffotpad, which is rich in lymphatics. Our objective was to better understand the modulation of Pb granuloma in an immunocompetent animal inoculated in an immunologically privileged site. The humoral immune response (ELISA) and cell mediated immunity (footpad test) became positive on days 7 and 14, respectively in animal inoculated into footpad and on days 35 and 60 in animals inoculated into the pouch. Typical epithelioid granulomas were observed at both sites on day 14. The number of fungi gradually decreased from the beginning of the experiment in footpad lesions, but only after day 35 in pouch granulomas, when cell mediated immunity was detectable. The results indicate that typical epithelioid paracoccidioidomycotic granulomas may develop in the absence of a detectable immune response; however, they are incapable of controlling fungal reproduction. Lack of lymphatic drainage delays the appearance of a detectable immune response, but with time fungi escape from the pouch, elicit an immune response and reach other organs. Our results further indicate the importance of the lymphatics in the pathogenesis of paracoccidioidomycosis.
Assuntos
Camundongos , Bochecha/anormalidades , Bochecha/lesões , Bochecha/microbiologia , Granuloma/fisiopatologia , Granuloma/microbiologia , Paracoccidioidomicose/complicações , Paracoccidioidomicose/diagnóstico , Paracoccidioidomicose/fisiopatologia , Paracoccidioidomicose/microbiologia , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/instrumentação , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/métodos , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/tendências , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/veterináriaRESUMO
Se realizó un estudio en 35 sueros de agricultores (mayor ó igual a 13 años), residentes en el distrito de Sapillica, provincia de Ayabaca, departamento de Piura, a fin de determinar anticuerpos IgM e IgG a Borrelia burgdorferi utilizando la prueba de ELISA (kig Sigma Diagnostic, MO-USA). 3 (8.57 por ciento) de los 35 sueros fueron positivos con valores de indice de 1.34, 1.78 y 1.08. El descarte de reacción cruzada con otras pruebas: Venereal Disease Research Laboratory, anticuerpos treponémicos fluorescentes (FTA), factor reumatoideo (RF), reacción de aglutinación microscópica (RAM) para leptospira interrogans y biflexa y anticuerpo antinucleares (ANA), fueron negativos en todos los sueros positivos a Borrelia burgdorferi, con excepción de una muestra que fue reactiva a FTA. Los agricultores investigados han sido considerados como grupo de riesgo para Borreliosis de Lyme, por el tipo de actividad laboral que realizan y por la presencia de Haemaphysalis leporispalustris e Ixodes en Piura. Los resultados obtenidos demostraron la presencia IgM e IgG a títulos mayores del valor positivo de corte e índice, que sugieren infección producida por Borrelia burgdorferi
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adolescente , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Doença de Lyme/etiologia , Testes Sorológicos , Peru , Imunoglobulina G/análise , Imunoglobulina G/fisiologia , Imunoglobulina G , Imunoglobulina M/análise , Imunoglobulina M/fisiologia , Imunoglobulina M , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/instrumentação , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/tendências , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Doença de Lyme/diagnóstico , Doença de Lyme/imunologia , Doença de Lyme/epidemiologia , Borrelia burgdorferi/imunologia , Borrelia burgdorferi/patogenicidadeRESUMO
Utilizando un micrometodo de ELISA, se investigo la presencia de anticuerpos sericos contra antigenos solubles de Leishmania braziliensis en 73 pacientes con leishmaniasis, en 15 enfermos con tripanosomiasis americana, en 10 personas con paludismo y en 25 individuos sanos. La prueba revelo anticuerpos em 100 por ciento de los sueros de casos de leishmaniasis visceral cutaneomucosa y cutanea difusa, asi como en 74,5 por ciento de los sueros de formas cutaneas localizadas. Los titulos mayores se observaron en la leishmaniasis visceral, descendiendo progressivamente en las formas cutaneomucosas, cutaneas difusas y cutaneas localizadas. En 4 pacientes con fromas viscerales se comprobo descenso significativo de los titulos 1 ano despues del tratamiento con Glucantime. El procedimiento provoco reacciones no especificas en 80 por ciento de los sueros de tripanosomiasis americana. Sin embargo, los titulos en estos casos resultaron significativamente mas bajos que los observados en la leishmaniasis visceral y cutaneomucosa. La prueba resulto reproducible, rapida y economica, siendo suficiente 1,0 mg de antigeno para examinar (por triplicado) 55 sueros. En base a estos hallazgos se recomienda su empleo en le estudio inmunologico de la leishmaniasis americana y se postula que el uso de antigenos especificos permitira reducir su inespecicificidad