RESUMO

The pentadecapeptide comprising the 104-118 amino acid sequence of the ilotropin-derived Reg3-related islet neogenesis-associated protein (INGAP-PP) has been implicated in beta cell neogenesis and enhancement of insulin secretion in pancreatic islets. The aim of this study was to investigate intracellular pathways by which INGAP-PP signals in insulin-producing cells. Treatment with INGAP-PP increased insulin secretion and intracellular calcium levels in MIN6 cells. INGAP-PP exposure activated c-Myc, serum and particularly nuclear factor-kappaB (NF-kappaB) response elements in insulin-producing cells (1.7+/-0.1, 1.8+/-0.1, 2.4+/-0.3 for RINm5F, and 1.3+/-0.1, 1.3+/-0.1 and 1.6+/-0.1 fold for MIN6 cells compared to controls, respectively). There was an increase in the proliferation rate of viable cells (162+/-17% for RINm5F and 155+/-13% for MIN6) that was accompanied by an increase in proliferating cell nuclear antigen (PCNA) protein expression (187+/-19% and 170+/-8% for RINm5F and MIN6 cells respectively) following INGAP-PP treatment. INGAP-PP increased the expression of the muscarinic M(3) receptor subtype (169+/-4% for RINm5F and 222+/-20% for MIN6 cells). Activation of multiple serum response elements by foetal calf serum also increased muscarinic M(3) receptor expression (173+/-9% for RINm5F and 140+/-7% for MIN6 cells). The blockade of NF-kappaB signalling pathway strongly decreased muscarinic M(3) receptor expression in response to both stimuli. In summary, a network of intracellular signals that includes activation of c-Myc signalling pathway and increased PCNA expression might be related to the increased proliferation rate of insulin-producing cells following incubation with INGAP-PP. NF-kappaB signalling plays an essential role in controlling the expression of the muscarinic M(3) receptor.

Assuntos

Acetilcolina/metabolismo , Citocinas/farmacologia , Regulação da Expressão Gênica/efeitos dos fármacos , Células Secretoras de Insulina/citologia , Fragmentos de Peptídeos/farmacologia , Receptor Muscarínico M3/metabolismo , Transdução de Sinais/efeitos dos fármacos , Fator de Transcrição RelA/metabolismo , Transporte Ativo do Núcleo Celular/efeitos dos fármacos , Sequência de Aminoácidos , Animais , Sequência de Bases , Carbacol/farmacologia , Domínio Catalítico , Linhagem Celular Tumoral , Núcleo Celular/efeitos dos fármacos , Núcleo Celular/metabolismo , Proliferação de Células/efeitos dos fármacos , Citocinas/química , Técnicas de Silenciamento de Genes , Células Secretoras de Insulina/efeitos dos fármacos , Células Secretoras de Insulina/metabolismo , Espaço Intracelular/efeitos dos fármacos , Espaço Intracelular/metabolismo , Camundongos , Dados de Sequência Molecular , Proteínas Associadas a Pancreatite , Fragmentos de Peptídeos/química , Fosfatidilinositol 3-Quinases/química , Fosfatidilinositol 3-Quinases/metabolismo , Antígeno Nuclear de Célula em Proliferação/metabolismo , Proteínas Proto-Oncogênicas c-akt/metabolismo , Proteínas Proto-Oncogênicas c-myc/metabolismo , RNA Interferente Pequeno/genética , Ratos , Reprodutibilidade dos Testes , Proteínas Quinases S6 Ribossômicas 70-kDa/metabolismo , Elemento de Resposta Sérica/genética , Fator de Transcrição RelA/deficiência , Fator de Transcrição RelA/genética , Regulação para Cima/efeitos dos fármacos